构建及鉴定人生存素基因的慢病毒表达载体

• 作 者: 赵亮 张国庆 马学晓 杨堃 胡有谷 陈伯华
• 机 构: 青岛大学医学院附属医院脊柱外科,青岛大学医学院附属医院中心实验室
• 出 处: 中国组织工程研究
• 发表日期: 2014年11期
• 关键词: 组织构建 组织工程 生存素 慢病毒 髓核细胞 细胞凋亡 基因转染 国家自然科学基金 lentivirus osteocytes cell apoptosis i
• 基金项目: 国家自然科学基金（81171758）

背景：抑制椎间盘细胞的凋亡可以延缓椎间盘的退变，而生存素具有调节细胞增殖和抗凋亡功能。目的：构建人生存素基因的慢病毒载体。方法：应用全基因合成技术合成人生存素基因（BIRC5），通过 PCR扩增目的基因并对 PCR 结果进行电泳分析。将目的基因克隆到慢病毒表达质粒构建重组慢病毒质粒 Lenti-BIRC5。将重组的慢病毒质粒转化细菌感受态细胞，PCR鉴定阳性的克隆进行基因测序。将含有目的基因的慢病毒质粒转染293T细胞，应用Western blot技术对重组慢病毒载体 Flag-Survivin 融合蛋白