【摘 要】
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目的探讨双重荧光实时聚合酶链反应(real-time PCR)在肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,MP)对大环内酯类抗生素耐药基因检测中的应用。方法19例自临床咽拭子样品分离培养的
【机 构】
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杭州市第一人民医院,浙江,310006
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目的探讨双重荧光实时聚合酶链反应(real-time PCR)在肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,MP)对大环内酯类抗生素耐药基因检测中的应用。方法19例自临床咽拭子样品分离培养的肺炎支原体及标准菌株,FH,进行体外药物敏感试验,并用自行设计的双重荧光Real-time PCR检测大环内酯类抗生素耐药基因型,同时对相应序列测序分析。抽提127份经PCR测定MP阳性的临床样品基因组DNA,用MP阴性的基因组DNA抽提物5份做阴性对照,用Real-time PCR检测大环内酯类抗生素耐药基因型。结果19例分离培养的MP,体外药物敏感试验结果显示15株有耐药,并且都有23S核糖体RNA(rRNA)V区基因A2063G位点突变;而4株对大环内酯类抗生素敏感的MP基因型为23S rRNA V区基因2063A;测序结果证实Real-time PCR结果。127份MP阳性的基因组DNA抽提物,5份用MP阴性的基因组DNA抽提物,经Real-time PCR检测,其中122份样品为MP 23S rRNA V区基因A2063G位点突变,2份样品的2063位点碱基为A,还有3份样品的2063位点碱基既有A又有G。127份MP阳性的样品在Real-timePCR检测中未见到2条荧光曲线都不生长的情况。5份阴性对照2条荧光曲线都不生长。结论双重荧光Real-timePCR能为临床快速、准确检测MP对大环内酯类抗生素耐药的基因型。
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