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摘要:目的:建立益脑复智片的质量标准。方法:秉用薄层色谱鉴别法鉴别黄芪、三七、大黄、郁金、石菖蒲。结果:薄层色谱(TLC)斑点圆整清晰,空白对照无干扰。结论:该方法简便,可用于本品质量控制。
关键词:益脑复智片;黄芪;三七;大黄;郁金;石菖蒲;TLC
中图分类号:R284.1 文献标识码:A
文章编号:1007—2349(2010)11—0062—03
益脑复智片为文山州中医医院的经验方,由黄芪、三七、大黄、郁金、石莒蒲等30味中药组成。具有补气益脑、豁痰开窍、活血化瘀、宁心安神等功效,临床用于精神分裂症所致的幻觉、妄想、智力下降、思维障碍等疾病;临床疗效显著,但欠缺完善的质量标准。本文通过对方中主药黄芪、三七、大黄、郁金、石菖蒲进行TLC鉴别研究,得到可靠、满意的结果,为该制剂质量控制提供了依据。
1 仪器与实验材料
实验样品由文山州中医医院提供(批号:20070512);对照品:黄芪甲苷(批号:0781—200311),三七皂苷R1(批号:110745—200312),人参皂苷Rb1(批号:110704—200420),人参皂苷Rg1(批号:0703—200221);对照药材:大黄(批号:902—9405),郁金(批号:909—9903),石菖蒲(批号:1098—200001)均购自中国药品生物制品检定所;阴性对照药材经鉴定均符合《中国药典》2005年版一部规定;硅胶G板批号为20081025(青岛海洋化工厂分厂),硅胶H板批号为20060227(青岛海洋化工厂分厂);所用试剂均为分析纯。
2 实验方法和结果
2.1 黄芪和三七的鉴别
2.1.1 供试液的制备取本品20片,研细,加甲醇30 mL,加热回流提取1h,滤过,滤液蒸干,残渣加水20 mL使溶解,滤过,滤液用水饱和的正丁醇提取2次,每次15 mL,合并正丁醇提取液,以5%碳酸钠溶液洗涤2次,每次10 mL,弃去碱层,正丁醇液蒸干,残渣加水5 mL使溶解,通过D10I大孔树脂柱中(内径1.5 cm,长12 cm)。用水50 mL洗脱,弃去水液,再用40%乙醇40 mL洗脱,弃去洗脱液,继用70%乙醇50 mL洗脱,收集70%乙醇洗脱液,蒸干,加甲醇1 mL使溶解,作供试品溶液。
2.1.2 对照溶液的制备取黄芪甲苷对照品,加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液,作为对照品溶液。再取三七皂苷R对照品,人参皂苷Rb1及人参皂苷Rg1对照品,加甲醇制成每1 mL塔含1 mg的混合溶液,作为对照品溶液。
2.1.3 阴性对照溶液的制备取除被检相应药材按处方缺味配制相当量的片剂,同“2.1.1”制成阴性对照溶液。
2.1.4 薄层色谱照薄层色谱法(《中国药典32005年版一部附录VIB)试验,吸取上述3种溶液各2mL,分别点于同一硅胶G薄层板上(硅胶G板预先活化1h,放冷),以氯仿一甲醇一水(30:8:1)的溶液为展开剂,进行二次展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在110℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。相应的阴性对照无干扰。见图1。
2.2 大黄的薄层色谱鉴别
2.2.1 供试液的制备取本品60片,研细,加甲醇20 mL,冷浸1 h,滤过,取滤液5 mL,蒸去甲醇,残渣加水5 mL使溶解,滴加盐酸0.5 mL,在水浴中加热30 min,放冷,用乙醚15 mL分2次提取,合并提取液,蒸干,残渣加氯仿1 mL使溶解,作为供试品溶液。
2.2.2 对照溶液的制备取大黄对照药材0.1 g,研细,加甲醇20 mL,冷浸1 h,滤过,取滤液5 mL,蒸去甲醇,残渣加水5 mL使溶解,滴加盐酸0.5 mL,在水浴中加热30 min,放冷,用乙醚15 mL分2次提取,合并提取液,蒸干,残渣加乙酸乙酯1 mL制成对照药材溶液。
2.2.3 阴性对照溶液的制备取除被检相应药材按处方缺味配制相当量的片剂,同“2.2.1”制成阴性对照溶液。
2.2.4 薄层色谱照薄层色谱法(《中国药典32005年版一部附录VIB)试验,吸取上述3种溶液各4μL,分别点于同一含羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上,以石油醚(30℃～60℃)一甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的橙色荧光主斑点,置氨气中熏后,斑点变为红色。相应的阴性对照无干扰。见图2。
2.3 郁金的薄层色谱鉴别
2.3.1 供试液的制备
取本品40片,研细,加无水乙醇30 mL,超声处理30 min,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇1 mL使溶解,作为供试品溶液。
2.3.2 对照溶液的制备取郁金对照药材2 g,加无水乙醇30 mL,超声处理30 min,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇1 mL使溶解,作为对照溶液。
2.3.3 阴性对照溶液的制备取除被检相应药材按处方缺味配制相当量的片剂,同“2.3.1”制成阴性对照溶液。
2.3.4 薄层色谱照薄层色谱法(《中国药典>>2005年版一部附录VIB)试验,吸取上述3种溶液各5μL,点于同一硅胶G板,以正己烷一乙酸乙酯(17:3)为展开剂,预先饱和30 min,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰。在日光下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相同位置上显相同颜色的主斑点。相应的阴性对照无干扰。见图3。
2.4 石菖蒲的薄层色谱鉴别
2.4.1 供试品溶液的制备取本品10片,研细,加石油醚(60℃～90。C)20 mL,加热回流1 h,滤过,滤液蒸干,残渣加石油醚(60℃～90℃)1 mL使溶解,作为供试品溶液。
2.4.2 对照品溶液的制备取石菖蒲对照药材0.2 g,加石油醚(60℃～90℃)20 mL,加热回流1 h,滤过,滤液蒸干,残渣加石油醚(60℃～90℃)1 mL使溶解,作为对照品溶液。
2.4.3 阴性对照溶液的制备取除被检相应药材按处方缺昧配制相当量的合剂,取50 mL,置分液漏斗中,用石油醚(60℃～90℃)提取,提取液滤过,滤液浓缩至1 mL作为阴性对照溶液。
2.4.4 薄层色谱照薄层色谱法(《中国药典>)2005年版一部附录VIB)试验,吸取上述3种溶液各5 mL点于同一硅胶G板,以石油醚(60℃～90℃)一乙酸乙酯(4:1)为展开剂,展开,取出,晾干,放置1 h,置紫外光(365 nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相同位置上显相同颜色的主斑 点。放置于碘蒸汽中熏后,显相应黄色主斑点,相应的阴性对照无干扰。见图4。
3 讨论
对于中药复方制剂的鉴别,应根据其特点,寻找简便、快速,并具有较强专属性的方法,才能起到有效控制质量的目的。为了更好的控制益脑复智片药品的质量标准,本文制定了黄芪、三七、大黄、郁金、石菖蒲的薄层色谱鉴别,从而更好地控制该药品的质量,保证临床疗效。
本试验在进行黄芪和三七的鉴别时,均采用活化1 h后的硅胶G薄层板。在黄芪和三七两种成分同时存在的情况下进行提取后,曾采用《中国药典>>2005年版一部对三七和黄芪的提取方法,并分别以展开系统三氯甲烷一乙酸乙酯一甲酸一水(15:40:22:IO)10℃以下放置的下层溶液和展开系统三氯甲烷一甲醇一水(13:7:2)的下层溶液为展开剂进行展开。结果两种方法的薄层图谱干扰较大,两种成分有重合瑚象,重现性不好。根据文献报道:采取对初提取液进行再处理,即通过用水饱和的正丁醇提取,以5%碳酸钠溶液洗涤,再通过D101大孔树脂柱进行吸附和不同浓度的乙醇液洗脱后的提取液处理,除去主方中杂质成分得到主含三七皂苷R1,人参皂苷Rb1,人参皂苷Rg1和黄芪皂苷组分,再经展开系统三氯甲烷
甲醇一水(30:8:1)的二次展开,得到满意的分离效果。
大黄的鉴别,依据文献使用了展开系统正己烷一乙酸乙酯一甲酸(30:10:0.5)进行展开,色谱图显示的斑点严重拖尾,并且不同组分投有完全分开,而本文所选择的方法恰能避免上述情况,故本文选用石油醚(30℃～60℃)一甲酸乙酯一甲酸(15:5:1)的上层溶液为展开剂,并且把原文献所选用的硅胶G板改变成含羟甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H板效果更好。
在石菖蒲的鉴别试验设计中,分别采用了不同沸程的石油醚(30℃～60℃,60℃～90℃)来提取石菖蒲中的鉴别成分,结果表明石油醚(60℃～90℃)提取效果更好,使得薄层色谱图中石菖蒲的特征斑点清晰可见。
本试验中对其成品中主要成分黄芪、三七、大黄、郁金、石菖蒲进行了薄层色谱鉴别研究,均采用了阴性对照试验,结果表明,各被检成分不受处方中其他群药的干扰,图谱完整,方法稳定,斑点清晰,专属性强,重现性好,阴性对照无干扰,可作为益脑复智片的有效定性鉴别方法。
关键词:益脑复智片;黄芪;三七;大黄;郁金;石菖蒲;TLC
中图分类号:R284.1 文献标识码:A
文章编号:1007—2349(2010)11—0062—03
益脑复智片为文山州中医医院的经验方,由黄芪、三七、大黄、郁金、石莒蒲等30味中药组成。具有补气益脑、豁痰开窍、活血化瘀、宁心安神等功效,临床用于精神分裂症所致的幻觉、妄想、智力下降、思维障碍等疾病;临床疗效显著,但欠缺完善的质量标准。本文通过对方中主药黄芪、三七、大黄、郁金、石菖蒲进行TLC鉴别研究,得到可靠、满意的结果,为该制剂质量控制提供了依据。
1 仪器与实验材料
实验样品由文山州中医医院提供(批号:20070512);对照品:黄芪甲苷(批号:0781—200311),三七皂苷R1(批号:110745—200312),人参皂苷Rb1(批号:110704—200420),人参皂苷Rg1(批号:0703—200221);对照药材:大黄(批号:902—9405),郁金(批号:909—9903),石菖蒲(批号:1098—200001)均购自中国药品生物制品检定所;阴性对照药材经鉴定均符合《中国药典》2005年版一部规定;硅胶G板批号为20081025(青岛海洋化工厂分厂),硅胶H板批号为20060227(青岛海洋化工厂分厂);所用试剂均为分析纯。
2 实验方法和结果
2.1 黄芪和三七的鉴别
2.1.1 供试液的制备取本品20片,研细,加甲醇30 mL,加热回流提取1h,滤过,滤液蒸干,残渣加水20 mL使溶解,滤过,滤液用水饱和的正丁醇提取2次,每次15 mL,合并正丁醇提取液,以5%碳酸钠溶液洗涤2次,每次10 mL,弃去碱层,正丁醇液蒸干,残渣加水5 mL使溶解,通过D10I大孔树脂柱中(内径1.5 cm,长12 cm)。用水50 mL洗脱,弃去水液,再用40%乙醇40 mL洗脱,弃去洗脱液,继用70%乙醇50 mL洗脱,收集70%乙醇洗脱液,蒸干,加甲醇1 mL使溶解,作供试品溶液。
2.1.2 对照溶液的制备取黄芪甲苷对照品,加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液,作为对照品溶液。再取三七皂苷R对照品,人参皂苷Rb1及人参皂苷Rg1对照品,加甲醇制成每1 mL塔含1 mg的混合溶液,作为对照品溶液。
2.1.3 阴性对照溶液的制备取除被检相应药材按处方缺味配制相当量的片剂,同“2.1.1”制成阴性对照溶液。
2.1.4 薄层色谱照薄层色谱法(《中国药典32005年版一部附录VIB)试验,吸取上述3种溶液各2mL,分别点于同一硅胶G薄层板上(硅胶G板预先活化1h,放冷),以氯仿一甲醇一水(30:8:1)的溶液为展开剂,进行二次展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在110℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。相应的阴性对照无干扰。见图1。
2.2 大黄的薄层色谱鉴别
2.2.1 供试液的制备取本品60片,研细,加甲醇20 mL,冷浸1 h,滤过,取滤液5 mL,蒸去甲醇,残渣加水5 mL使溶解,滴加盐酸0.5 mL,在水浴中加热30 min,放冷,用乙醚15 mL分2次提取,合并提取液,蒸干,残渣加氯仿1 mL使溶解,作为供试品溶液。
2.2.2 对照溶液的制备取大黄对照药材0.1 g,研细,加甲醇20 mL,冷浸1 h,滤过,取滤液5 mL,蒸去甲醇,残渣加水5 mL使溶解,滴加盐酸0.5 mL,在水浴中加热30 min,放冷,用乙醚15 mL分2次提取,合并提取液,蒸干,残渣加乙酸乙酯1 mL制成对照药材溶液。
2.2.3 阴性对照溶液的制备取除被检相应药材按处方缺味配制相当量的片剂,同“2.2.1”制成阴性对照溶液。
2.2.4 薄层色谱照薄层色谱法(《中国药典32005年版一部附录VIB)试验,吸取上述3种溶液各4μL,分别点于同一含羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上,以石油醚(30℃～60℃)一甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的橙色荧光主斑点,置氨气中熏后,斑点变为红色。相应的阴性对照无干扰。见图2。
2.3 郁金的薄层色谱鉴别
2.3.1 供试液的制备
取本品40片,研细,加无水乙醇30 mL,超声处理30 min,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇1 mL使溶解,作为供试品溶液。
2.3.2 对照溶液的制备取郁金对照药材2 g,加无水乙醇30 mL,超声处理30 min,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇1 mL使溶解,作为对照溶液。
2.3.3 阴性对照溶液的制备取除被检相应药材按处方缺味配制相当量的片剂,同“2.3.1”制成阴性对照溶液。
2.3.4 薄层色谱照薄层色谱法(《中国药典>>2005年版一部附录VIB)试验,吸取上述3种溶液各5μL,点于同一硅胶G板,以正己烷一乙酸乙酯(17:3)为展开剂,预先饱和30 min,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰。在日光下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相同位置上显相同颜色的主斑点。相应的阴性对照无干扰。见图3。
2.4 石菖蒲的薄层色谱鉴别
2.4.1 供试品溶液的制备取本品10片,研细,加石油醚(60℃～90。C)20 mL,加热回流1 h,滤过,滤液蒸干,残渣加石油醚(60℃～90℃)1 mL使溶解,作为供试品溶液。
2.4.2 对照品溶液的制备取石菖蒲对照药材0.2 g,加石油醚(60℃～90℃)20 mL,加热回流1 h,滤过,滤液蒸干,残渣加石油醚(60℃～90℃)1 mL使溶解,作为对照品溶液。
2.4.3 阴性对照溶液的制备取除被检相应药材按处方缺昧配制相当量的合剂,取50 mL,置分液漏斗中,用石油醚(60℃～90℃)提取,提取液滤过,滤液浓缩至1 mL作为阴性对照溶液。
2.4.4 薄层色谱照薄层色谱法(《中国药典>)2005年版一部附录VIB)试验,吸取上述3种溶液各5 mL点于同一硅胶G板,以石油醚(60℃～90℃)一乙酸乙酯(4:1)为展开剂,展开,取出,晾干,放置1 h,置紫外光(365 nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相同位置上显相同颜色的主斑 点。放置于碘蒸汽中熏后,显相应黄色主斑点,相应的阴性对照无干扰。见图4。
3 讨论
对于中药复方制剂的鉴别,应根据其特点,寻找简便、快速,并具有较强专属性的方法,才能起到有效控制质量的目的。为了更好的控制益脑复智片药品的质量标准,本文制定了黄芪、三七、大黄、郁金、石菖蒲的薄层色谱鉴别,从而更好地控制该药品的质量,保证临床疗效。
本试验在进行黄芪和三七的鉴别时,均采用活化1 h后的硅胶G薄层板。在黄芪和三七两种成分同时存在的情况下进行提取后,曾采用《中国药典>>2005年版一部对三七和黄芪的提取方法,并分别以展开系统三氯甲烷一乙酸乙酯一甲酸一水(15:40:22:IO)10℃以下放置的下层溶液和展开系统三氯甲烷一甲醇一水(13:7:2)的下层溶液为展开剂进行展开。结果两种方法的薄层图谱干扰较大,两种成分有重合瑚象,重现性不好。根据文献报道:采取对初提取液进行再处理,即通过用水饱和的正丁醇提取,以5%碳酸钠溶液洗涤,再通过D101大孔树脂柱进行吸附和不同浓度的乙醇液洗脱后的提取液处理,除去主方中杂质成分得到主含三七皂苷R1,人参皂苷Rb1,人参皂苷Rg1和黄芪皂苷组分,再经展开系统三氯甲烷
甲醇一水(30:8:1)的二次展开,得到满意的分离效果。
大黄的鉴别,依据文献使用了展开系统正己烷一乙酸乙酯一甲酸(30:10:0.5)进行展开,色谱图显示的斑点严重拖尾,并且不同组分投有完全分开,而本文所选择的方法恰能避免上述情况,故本文选用石油醚(30℃～60℃)一甲酸乙酯一甲酸(15:5:1)的上层溶液为展开剂,并且把原文献所选用的硅胶G板改变成含羟甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H板效果更好。
在石菖蒲的鉴别试验设计中,分别采用了不同沸程的石油醚(30℃～60℃,60℃～90℃)来提取石菖蒲中的鉴别成分,结果表明石油醚(60℃～90℃)提取效果更好,使得薄层色谱图中石菖蒲的特征斑点清晰可见。
本试验中对其成品中主要成分黄芪、三七、大黄、郁金、石菖蒲进行了薄层色谱鉴别研究,均采用了阴性对照试验,结果表明,各被检成分不受处方中其他群药的干扰,图谱完整,方法稳定,斑点清晰,专属性强,重现性好,阴性对照无干扰,可作为益脑复智片的有效定性鉴别方法。