【摘 要】
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利用核酸切割酶(Nicking endonuclease)识别特定DNA双链并切割其中某条单链的性质,构建了基于8-17E脱氧核酶(8-17E DNAzyme)的Pb2+荧光循环放大检测方法。Pb2+可激活8-17E脱
【机 构】
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西安交通大学生命科学与技术学院生物医学信息工程教育部重点实验室,中国烟草总公司陕西省公司,陕西烟草质量监督检测站
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利用核酸切割酶(Nicking endonuclease)识别特定DNA双链并切割其中某条单链的性质,构建了基于8-17E脱氧核酶(8-17E DNAzyme)的Pb2+荧光循环放大检测方法。Pb2+可激活8-17E脱氧核酶水解RNA底物,产生并释放出的单链与分子信标探针(Molecular beacon,MB)杂交,导致其茎环结构被破坏,荧光信号恢复;同时形成含有核酸切割酶Nt.BbvCΙ识别位点的双链区域。在核酸切割酶Nt.BbvCΙ的作用下,分子信标探针被切割释放,游离出来的单链可与其它分子信标重新杂交,从而触发下一轮酶切,引起荧光检测信号的循环放大。本方法避免了8-17E脱氧核酶与底物链的修饰,最低可以检测出水溶液中1.0×10-10mol/L Pb2+,并在2倍浓度的Zn2+,以及5倍浓度的其它干扰金属离子存在的情况下对Pb2+显示出良好的选择性。本方法对环境水样中Pb2+的标准加样回收率为96.1%～108.0%。
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