类泛素化蛋白NEDD8单克隆抗体制备

• 作 者: 姚威 孙海伟 霍娜 于婉琪 萧飒 陈鸿军
• 机 构: 中国农业科学院上海兽医研究所,西北农林科技大学动物医学院
• 出 处: 中国动物传染病学报
• 发表日期: 2019年6期
• 关键词: NEDDYLATION NEDD8 单克隆抗体 NEDDylation NEDD8 monoclonal antibody
• 基金项目: 国家自然科学基金面上项目资助(31572502)

利用RT-PCR从A549细胞中扩增出类泛素化蛋白编码的nedd8基因,将其克隆至原核表达载体p ET-30a(+)中,测序验证后转化入BL21(DE3)进行IPTG诱导,表达获得NEDD8蛋白,经纯化后,免疫接种6周龄BALB/c小鼠。细胞融合后,用ELISA和Western blot方法筛选单克隆抗体细胞株。结果成功制备获得3株单克隆抗体。免疫特异性鉴定结果表明,所得到的3株单抗适用于Co-IP试验,可以特异性检测NEDD8修饰的Cullin-1底物。通过分段表达鉴定单抗针对的抗原表位可能在29RVE