论文部分内容阅读
摘 要：本文中主要介绍了如何对头孢他啶的相应含量以及所含有的杂质进行测量，目前广泛采用的一种方式为高效液相色谱法，这是一种运用色谱柱进行检验的方法，能够更加精准的对相关物质进行检测，从而实现更加有效的检验效果。与其他的检测方法相比较，这一方法的运用能够将杂质进行更为有效的分离，并且杂质分离的数量也相对较多，具有分离度高的特点。希望通过本文的论述能够为相关研究人员的检测起到一定的促进作用，为头孢他啶的检验提供更加全新的方法。
关键词：头孢他啶；高效液相色谱法；梯度洗脱；杂质
在对头孢他啶进行检测的过程中，因为其自身具有一定的不稳定性，因此极容易受到杂质的影响。头孢他啶属于第三代头孢菌素，具有较强的抗菌性，但是在酸、碱以及酶的共同作用下，也会产生一定的脱羧反应，当对其进行加热时，其内部结构也会产生反应，转化为△-3异构体，在对其进行光照时，又会转化为E-异构体，由此可见，头孢他啶是一种十分活跃的头孢菌素，如果生产以及存储过程中不对其进行严格的检测，极容易出现毒副反应，带来不必要的影响，因此本文将采用高效液相色谱法对头孢他啶的含量以及所蕴含的杂质进行检测，期望达到理想的结果。
1 头孢他啶的实验部分
1.1 实验仪器以及试剂的选用
首先选择高效液相色谱法中需要的仪器，主要分为三部分，一是LC-20AT泵，二是SPD-M20A二极管阵列相关检测仪器，三是选用对数据进行录入与计算的操作软件，型号为LCsolution。
在试剂的选用上，所采用的试剂均是分析纯，其中乙腈以及甲醇的来源是美国某试剂公司的产品，由我国某药物制药公司提供了头孢他啶的对照品，均来自于统一的批号，其中头孢他啶的主要含量为84.2%，美国药典委会提供了△-3异构体，第二批次用于注射的头孢他啶来源于两家制药公司，一家为国内，一家为国外，由此试剂与仪器阶段的准备工作完毕。
1.2 高效液相色谱法的色谱条件
在实验中，采用的色谱柱型号为Alltima C18色谱柱，其规格为250mm×4.6mm，粒度为5μm。将乙腈以及事先稀释过的磷酸盐缓冲溶液分为两组，一组是流动相A，另外一组是流动相B，采用梯度洗脱的方式加以处理，将流动速度控制为每分钟1.3mL/min。其中检测的波长调整到255nm，将柱温控制在35℃，并且保持不变。并且理论塔板数的计算标准是与相关规定相一致的，在上述色谱条件下进行有效的分离。
1.3 对样品溶液比例进行配制
本实验中，需要配制三种类型的溶液。一种是标准溶液，选取适量的头孢他啶，与流动相进行配制，最终配制的溶液结果为0.85mg/mL。二是进行供试品溶液的配制。同样选用一定含量的头孢他啶样品，与流动相相融合，配合成含量为0.85mg/mL的溶液。三是进行储备液的配制，采用精密称取的方式称取适量的头孢他啶对照品，将对照品与流动相融合，配制成比例为1.0mg/mL的溶液若干。
1.4 制备加速降解溶液
加速降解溶液主要包含三部分，一部分是酸降解溶液，将60mg的头孢他啶对照品置于容量为50mL的量瓶中，并且加入适量的盐酸溶液，盐酸溶液的比例为0.1mol/L，容量为5mL，然后再加入适量的水进行稀释，并且摇匀，达到指定刻度后放置好备用。一部分是碱降解溶液，这部分溶液的配制与前者相类似，将60mg的对照品放入50mL的量瓶中，放入氢氧化钠溶液进行稀释，稀释完成后将其放置在沸水浴中。最后一部分是制备湿热降解溶液，在温度为60℃，湿度为60%的环境下进行制备，选用头孢他啶对照品60mg，将其放置在保湿箱中，待5h后取出，加入适量的流动相进行稀释，并且摇匀。
1.5 实验评价
实验的评价依据来源于中国药典的相关规定，主要检验的内容包括线性、选择性、检出限、定量限以及精密度等相关的数据，确保检验结果的稳定性。
2 实验结果以及讨论
2.1 对分离条件的确定
根据国际上药典的相关分析方法，在检验头孢他啶中所含有的杂质时，采用等度洗脱的方式，本实验中获得了良好的分离效果，集中体现在主峰出峰前的检验中，在出峰后，杂质也没有显现。加大流动相溶剂，杂质峰出现的情况较多。表示杂质会吸附在色谱柱上得不到洗脱。在此色谱条件下，杂质在主峰出峰前所含有的杂质峰数量不多，但是相对密集，所以药典中所记载的头孢他啶含量以及杂质检测方法具有明显的不足之处。
2.2 评价方法
通过对头孢他啶主峰的峰纯度进行分析，其峰纯度指数为1.000000，即主峰为单一组分峰；头孢他啶的主要杂质如△-3异构体、7-ACA（头孢类母核）及头孢他啶溶液的酸、碱降解物及其固体在湿热条件下的降解物均不干扰主成分的测定，且诸杂质间可以得到较好的分离。取头孢他啶储备液适量，用流动相配制成13个不同浓度（0.267～1069μg/mL）的溶液，在“1.2”节的色谱条件下进行测定，以各自的峰面积y和质量浓度x（μg/mL）作线性回归，得到的线性方程为y=35709x，r=1.000。
按“1.3”节所述方法配制3个浓度（0.69，0.86，1.0mg/mL）的头孢他啶对照品溶液，进样20μL，每个浓度样品重复测定3次；连续3d测定，结果为3个浓度下的日内测定值的相对标准偏差为0.72%，日间测定值的偏差为0.91%。
取头孢他啶储备液逐步稀释到0.133μg/mL，按“1.2”节的色谱条件测得头孢他啶的定量限（以信噪比（S/N）=10计）和检出限（以S/N=3计）分别为3.1ng和0.93ng。
按“1.3”节方法配制头孢他啶标准溶液，在4℃且避光的条件下放置0，1.5，3.5，4.5，6，24h后分别取样测定，得主峰峰面积的偏差为0.18%，说明头孢他啶溶液在此条件下24h内保持稳定。
对数个色谱条件进行微小的变动，以考察方法的耐受能力。分别采用A、B和E型色谱柱评价不同类型的色谱柱对本方法的适用性。B型色谱柱中Alltima C18色谱柱最适合本方法；采用其他3根B型色谱柱分离时，主成分的保留时间均比较短，使得保留因子k（以硝酸钾甲醇溶液测定系统死时间为1.79min）在0.12～2.36范围的杂质峰（包括7-ACA、吡啶等）重叠或者无法很好地分离，且主成分峰均不同程度地前伸。采用A型的Hypersil BDSC18色谱柱时，头孢他啶的出峰时间较快，分离出的杂质数量仅有5种，且主峰前伸现象严重（拖尾因子为0.877）；调节流动相也无法达到B型色谱柱的分离效果。采用E型的Inertsil DIKMAODS-Ep色谱柱分离时，分离出的杂质数量仅有7种，主峰拖尾（拖尾因子为1.422）。虽然頭孢他啶的极性较大，在所使用的E型柱中表现出峰展宽，使得柱效大大降低，但不同嵌入基团的作用并不完全相同，因此E型色谱柱对本方法是否适宜有待于对具体的色谱柱进行考察。
3 结论
在采用严格的系统适应性实验基础上，建立头孢他啶药物中头孢他啶及杂质的HPLC分析方法较目前各国药典收载的方法，可有效地控制头孢他啶药物中的杂质，为中国药典收载头孢他啶药物中杂质的检测方法奠定基础。
参考文献
[1]张冬，郭毅，孙卫，韩国将.注射用头孢他啶的有关物质测定[J].中国药业，2008（13）.
[2]李薇.静脉用头孢他啶和头孢替安治疗小儿肠炎的效果探究[J].中国卫生标准管理，2015（21）.
[3]龚昌华，叶树位.终末期肾脏病患者应用头孢他啶后并发抗生素脑病的相关性分析[J].中国药房，2015（36）.
关键词：头孢他啶；高效液相色谱法；梯度洗脱；杂质
在对头孢他啶进行检测的过程中，因为其自身具有一定的不稳定性，因此极容易受到杂质的影响。头孢他啶属于第三代头孢菌素，具有较强的抗菌性，但是在酸、碱以及酶的共同作用下，也会产生一定的脱羧反应，当对其进行加热时，其内部结构也会产生反应，转化为△-3异构体，在对其进行光照时，又会转化为E-异构体，由此可见，头孢他啶是一种十分活跃的头孢菌素，如果生产以及存储过程中不对其进行严格的检测，极容易出现毒副反应，带来不必要的影响，因此本文将采用高效液相色谱法对头孢他啶的含量以及所蕴含的杂质进行检测，期望达到理想的结果。
1 头孢他啶的实验部分
1.1 实验仪器以及试剂的选用
首先选择高效液相色谱法中需要的仪器，主要分为三部分，一是LC-20AT泵，二是SPD-M20A二极管阵列相关检测仪器，三是选用对数据进行录入与计算的操作软件，型号为LCsolution。
在试剂的选用上，所采用的试剂均是分析纯，其中乙腈以及甲醇的来源是美国某试剂公司的产品，由我国某药物制药公司提供了头孢他啶的对照品，均来自于统一的批号，其中头孢他啶的主要含量为84.2%，美国药典委会提供了△-3异构体，第二批次用于注射的头孢他啶来源于两家制药公司，一家为国内，一家为国外，由此试剂与仪器阶段的准备工作完毕。
1.2 高效液相色谱法的色谱条件
在实验中，采用的色谱柱型号为Alltima C18色谱柱，其规格为250mm×4.6mm，粒度为5μm。将乙腈以及事先稀释过的磷酸盐缓冲溶液分为两组，一组是流动相A，另外一组是流动相B，采用梯度洗脱的方式加以处理，将流动速度控制为每分钟1.3mL/min。其中检测的波长调整到255nm，将柱温控制在35℃，并且保持不变。并且理论塔板数的计算标准是与相关规定相一致的，在上述色谱条件下进行有效的分离。
1.3 对样品溶液比例进行配制
本实验中，需要配制三种类型的溶液。一种是标准溶液，选取适量的头孢他啶，与流动相进行配制，最终配制的溶液结果为0.85mg/mL。二是进行供试品溶液的配制。同样选用一定含量的头孢他啶样品，与流动相相融合，配合成含量为0.85mg/mL的溶液。三是进行储备液的配制，采用精密称取的方式称取适量的头孢他啶对照品，将对照品与流动相融合，配制成比例为1.0mg/mL的溶液若干。
1.4 制备加速降解溶液
加速降解溶液主要包含三部分，一部分是酸降解溶液，将60mg的头孢他啶对照品置于容量为50mL的量瓶中，并且加入适量的盐酸溶液，盐酸溶液的比例为0.1mol/L，容量为5mL，然后再加入适量的水进行稀释，并且摇匀，达到指定刻度后放置好备用。一部分是碱降解溶液，这部分溶液的配制与前者相类似，将60mg的对照品放入50mL的量瓶中，放入氢氧化钠溶液进行稀释，稀释完成后将其放置在沸水浴中。最后一部分是制备湿热降解溶液，在温度为60℃，湿度为60%的环境下进行制备，选用头孢他啶对照品60mg，将其放置在保湿箱中，待5h后取出，加入适量的流动相进行稀释，并且摇匀。
1.5 实验评价
实验的评价依据来源于中国药典的相关规定，主要检验的内容包括线性、选择性、检出限、定量限以及精密度等相关的数据，确保检验结果的稳定性。
2 实验结果以及讨论
2.1 对分离条件的确定
根据国际上药典的相关分析方法，在检验头孢他啶中所含有的杂质时，采用等度洗脱的方式，本实验中获得了良好的分离效果，集中体现在主峰出峰前的检验中，在出峰后，杂质也没有显现。加大流动相溶剂，杂质峰出现的情况较多。表示杂质会吸附在色谱柱上得不到洗脱。在此色谱条件下，杂质在主峰出峰前所含有的杂质峰数量不多，但是相对密集，所以药典中所记载的头孢他啶含量以及杂质检测方法具有明显的不足之处。
2.2 评价方法
通过对头孢他啶主峰的峰纯度进行分析，其峰纯度指数为1.000000，即主峰为单一组分峰；头孢他啶的主要杂质如△-3异构体、7-ACA（头孢类母核）及头孢他啶溶液的酸、碱降解物及其固体在湿热条件下的降解物均不干扰主成分的测定，且诸杂质间可以得到较好的分离。取头孢他啶储备液适量，用流动相配制成13个不同浓度（0.267～1069μg/mL）的溶液，在“1.2”节的色谱条件下进行测定，以各自的峰面积y和质量浓度x（μg/mL）作线性回归，得到的线性方程为y=35709x，r=1.000。
按“1.3”节所述方法配制3个浓度（0.69，0.86，1.0mg/mL）的头孢他啶对照品溶液，进样20μL，每个浓度样品重复测定3次；连续3d测定，结果为3个浓度下的日内测定值的相对标准偏差为0.72%，日间测定值的偏差为0.91%。
取头孢他啶储备液逐步稀释到0.133μg/mL，按“1.2”节的色谱条件测得头孢他啶的定量限（以信噪比（S/N）=10计）和检出限（以S/N=3计）分别为3.1ng和0.93ng。
按“1.3”节方法配制头孢他啶标准溶液，在4℃且避光的条件下放置0，1.5，3.5，4.5，6，24h后分别取样测定，得主峰峰面积的偏差为0.18%，说明头孢他啶溶液在此条件下24h内保持稳定。
对数个色谱条件进行微小的变动，以考察方法的耐受能力。分别采用A、B和E型色谱柱评价不同类型的色谱柱对本方法的适用性。B型色谱柱中Alltima C18色谱柱最适合本方法；采用其他3根B型色谱柱分离时，主成分的保留时间均比较短，使得保留因子k（以硝酸钾甲醇溶液测定系统死时间为1.79min）在0.12～2.36范围的杂质峰（包括7-ACA、吡啶等）重叠或者无法很好地分离，且主成分峰均不同程度地前伸。采用A型的Hypersil BDSC18色谱柱时，头孢他啶的出峰时间较快，分离出的杂质数量仅有5种，且主峰前伸现象严重（拖尾因子为0.877）；调节流动相也无法达到B型色谱柱的分离效果。采用E型的Inertsil DIKMAODS-Ep色谱柱分离时，分离出的杂质数量仅有7种，主峰拖尾（拖尾因子为1.422）。虽然頭孢他啶的极性较大，在所使用的E型柱中表现出峰展宽，使得柱效大大降低，但不同嵌入基团的作用并不完全相同，因此E型色谱柱对本方法是否适宜有待于对具体的色谱柱进行考察。
3 结论
在采用严格的系统适应性实验基础上，建立头孢他啶药物中头孢他啶及杂质的HPLC分析方法较目前各国药典收载的方法，可有效地控制头孢他啶药物中的杂质，为中国药典收载头孢他啶药物中杂质的检测方法奠定基础。
参考文献
[1]张冬，郭毅，孙卫，韩国将.注射用头孢他啶的有关物质测定[J].中国药业，2008（13）.
[2]李薇.静脉用头孢他啶和头孢替安治疗小儿肠炎的效果探究[J].中国卫生标准管理，2015（21）.
[3]龚昌华，叶树位.终末期肾脏病患者应用头孢他啶后并发抗生素脑病的相关性分析[J].中国药房，2015（36）.