从重组融合蛋白包涵体中释放大环肽过程优化

• 作 者: 张晓杰 徐鸿涛 陈启助 罗利琼 沈娟 廖斌 张军
• 机 构: 广东药科大学广东省生物技术候选药物重点实验室生命科学与生物制药学院; 中山大学生命科学学院
• 出 处: 生物技术
• 发表日期: 2016年06期
• 关键词: 大环肽 包涵体 大环肽-内含肽-几丁质结合域 重组表达融合蛋白
• 基金项目: 国家自然科学基金项目(“宝山堇菜抗生物胁迫的转录组分析与CRP基因的鉴定”,No.31100198;“华南堇菜属植物比较转录组分析与重金属解毒大环肽定向进化”,No.31570506)

[目的]探索不同条件对包涵体复性的影响,优化重组融合蛋白包涵体中释放大环肽的工艺条件。[方法]对纯化后的包涵体进行不同变性液、透析方式及是否超声破碎处理的比较;并在此基础上探讨不同透析温度、谷胱甘肽浓度与L-Arg浓度对大环肽产量的影响。采用Tanon凝胶分析系统与紫外吸收法对大环肽的产量进行分析。[结果]使用8 mol/L的尿素溶解包涵体后,获得的上清液在25℃条件下,在含有1 mmol/L GSH、0.1 mmol/L GSSG、0.8mmol/L L-Arg的透析液中进行梯度透析,其得率为每克包涵体获得约1.4 mg大环肽。[结论]成功从包涵体中获得大环肽并优化工艺条件。