【摘 要】
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目的建立检测沙门氏菌的环介导等温扩增技术。方法针对沙门氏菌侵袭蛋白基因(invA),用LAMP引物在线设计软件设计4条特异性引物(内、外引物各2条),建立了快速检测食品中沙门氏
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目的建立检测沙门氏菌的环介导等温扩增技术。方法针对沙门氏菌侵袭蛋白基因(invA),用LAMP引物在线设计软件设计4条特异性引物(内、外引物各2条),建立了快速检测食品中沙门氏菌的环介导等温扩增方法。对dNTP浓度、Mg2+浓度、内引物浓度和外引物浓度等反应条件进行优化,并测定方法的特异性和灵敏度,然后用该方法对猪肉模拟样品和猪肉实物样品进行检测。结果优化的LAMP反应体系为:0.8 mmol/L dNTP,6.0 mmol/L MgCl2,0.2μmol/L外引物F3和B3,1.6μmol/L内引物FIP和BIP。对6种相关肠道细菌进行LAMP扩增,仅含invA基因的沙门氏菌扩增阳性。对细菌纯培养物检测的灵敏度为101 cfu/ml,对猪肉模拟样品检测的灵敏度为102 cfu/g。采用环介导等温扩增方法检测57份猪肉实物样品,invA基因阳性5份。LAMP方法检测(包括DNA提取、LAMP反应和电泳分析)可在2h内完成。结论检测沙门氏菌的环介导等温扩增方法快速、灵敏、特异,适合在基层食源性疾病监测和应急检测中应用。
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