【摘 要】
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目的将人巨细胞病毒PP150蛋白C端多肽与gp52蛋白片段融合, 构建表达该融合蛋白的工程菌. 方法合成PP150蛋白C端25个氨基酸的基因片段,并选用细菌偏爱的密码子.用PCR方法扩增gp52蛋白基因片段.将这2个基因片段分别克隆至同一质粒pET28a(+)内的NcoⅠ/BamHⅠ和BamHⅠ/EcoRⅠ位点,使两者串联在一起, 并且翻译框架一致,可表达1个融合蛋白.将重组质粒转化大肠杆菌,用酶
【机 构】
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南京军区军事医学研究所,中国药品生物制品检定所,
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目的将人巨细胞病毒PP150蛋白C端多肽与gp52蛋白片段融合, 构建表达该融合蛋白的工程菌. 方法合成PP150蛋白C端25个氨基酸的基因片段,并选用细菌偏爱的密码子.用PCR方法扩增gp52蛋白基因片段.将这2个基因片段分别克隆至同一质粒pET28a(+)内的NcoⅠ/BamHⅠ和BamHⅠ/EcoRⅠ位点,使两者串联在一起, 并且翻译框架一致,可表达1个融合蛋白.将重组质粒转化大肠杆菌,用酶切及SDS-PAGE等方法筛选表达融合蛋白的工程菌. 结果构建成功了高效表达PP150 C端多肽与gp52蛋白片段的融合蛋白工程菌,表达量为35%左右.初步纯化获得了表达的融合蛋白. 结论初步纯化的融合蛋白能与已知的抗gp52-IgM阳性血清和抗PP150-IgM阳性血清反应,说明融合蛋白C端的gp52蛋白保持较好的抗原性,融合蛋白N端的PP150 C端多肽也显示有抗原性.
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