【摘 要】
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目的 研究核因子NF-E2相关因子2(Nrf2)及硫氧还蛋白还原酶(TrxR)基因表达对慢性髓性白血病(CML)细胞增殖的影响并初步探讨其作用机制.方法 根据siRNA序列设计原则,设计并合成四条针对Nrf2的小分子干扰RNA (siRNA)及一条阴性对照siRNA,并构建慢病毒载体,转染CML细胞系K562细胞,以未转染的细胞作为空白对照；应用激光共聚焦显微镜观察转染效果,流式细胞术检测转染效率
【机 构】
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目的 研究核因子NF-E2相关因子2(Nrf2)及硫氧还蛋白还原酶(TrxR)基因表达对慢性髓性白血病(CML)细胞增殖的影响并初步探讨其作用机制.方法 根据siRNA序列设计原则,设计并合成四条针对Nrf2的小分子干扰RNA (siRNA)及一条阴性对照siRNA,并构建慢病毒载体,转染CML细胞系K562细胞,以未转染的细胞作为空白对照；应用激光共聚焦显微镜观察转染效果,流式细胞术检测转染效率；实时荧光定量PCR检测siRNA的抑制效应；CCK-8法检测细胞增殖抑制率；膜联蛋白A5(Annexin V-PE)/碘化丙锭(PI)双染法流式细胞术检测细胞凋亡率,激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡状态.结果 慢病毒转染效率达65％,实时荧光定量PCR检测显示明显抑制Nrf2表达的细胞克隆为K562-C3,其Nrf2相对表达水平(1.003±0.093)高于对照组(0.344±0.032)；TrxR相对表达水平(1.090±0.549)高于对照组(0.395±0.029),差异均有统计学意义(P值均＜0.001);CCK-8法检测显示转染Nrf2特异siRNA 24、48、72 h细胞的K562-C3细胞增殖抑制率分别为(4.74±0.39)％、(6.13±1.78)％和(25.36±3.77)％；转染72 h的K562-C3细胞凋亡率(29.9％)与对照组(7.9％)比较明显提高；激光共聚焦显微镜显示Annexin V-PE标记阳性细胞出现核固缩、核碎裂及凋亡小体形成等凋亡特征.结论 在细胞水平上,Nrf2特异的siRNA转染K562细胞可抑制Nrf2表达并引起下游调控的抗氧化酶如TrxR表达下调,抑制K562细胞增殖,促进细胞凋亡。
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