钙网织蛋白-短发夹RNA慢病毒载体构建及其对喉鳞状细胞癌细胞Hep-2中钙网织蛋白表达的影响

• 作 者: 高树峰 杨明福 张克辉 游龙贵 王富华 王心涛 刘遗斌 罗冬
• 机 构: 赣州市人民医院耳鼻咽喉头颈外科
• 出 处: 癌症进展
• 发表日期: 2020年24期
• 关键词: 钙网织蛋白 喉鳞状细胞癌 慢病毒载体 HEP-2 calreticulin laryngeal squamous cell carcinoma lentivir
• 基金项目: 江西省卫生计生委科技计划项目(20194058)

目的构建钙网织蛋白(CRT)-短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,并检测其对喉鳞状细胞癌细胞Hep-2中CRT表达的影响。方法设计CRT特异性靶序列,合成含有靶序列的线性化载体pSIH1-H1-copGFP,通过转染喉鳞状细胞癌细胞Hep-2筛选基因表达效率最高的靶序列。包装生产CRT-shRNA慢病毒并测定滴度,转染喉鳞状细胞癌Hep-2细胞,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测重组慢病毒载体对CRT基因在mRNA和蛋白水平的沉默效果。结果PCR阳性鉴