【摘 要】
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差异显示PCR技术是一种新近发展起来的在真核细胞中检测与克隆特异表达基因的手段。本文建立了用此技术克隆春化相关基因的研究系统,并提供了诸如总RNA的提取、污染DNA的去除
【机 构】
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北京大学生命科学学院细胞生物学与遗传学系,中国科学院植物研究所发育室,中国科学院植物研究所发育室 北京 100871,北京 100093,北京 100093
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差异显示PCR技术是一种新近发展起来的在真核细胞中检测与克隆特异表达基因的手段。本文建立了用此技术克隆春化相关基因的研究系统,并提供了诸如总RNA的提取、污染DNA的去除、sscDNA的逆转录、PCR参数、扩增cDNA的电泳、特异cDNA的收集与重扩增等在方法上的细节。用这种技术分离了一个仅在春化20天这一特异时期表达的春化设定cDNA克隆VPC28。这些结果也适用于更加广泛的类似研究。
Differential display PCR is a newly developed means of detecting and cloning specifically expressed genes in eukaryotic cells. In this paper, we have established a research system for cloning vernalization-related genes using this technique and provided such as extraction of total RNA, removal of contaminated DNA, reverse transcription of sscDNA, PCR parameters, electrophoresis of amplified cDNA, collection and re-amplification of specific cDNA By the methodological details. This technique was used to isolate a vernalization set cDNA clone, VPC28, that is expressed only at the specific stage of vernalization of 20 days. These results also apply to a wider range of similar studies.
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