【摘 要】
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目的观察前列腺素E2 （PGE2）4种受体（EP1-4R）对高糖环境中人视网膜微血管内皮细胞（hRMEC）中炎症小体活化和细胞损伤作用。方法将hRMEC分为正常组、高糖组，分别置于含5.5、30.0 mmol/L葡萄糖的Dulbecco改良Eagle培养基中培养。采用流式细胞仪观察高糖组、正常组的细胞凋亡率；酶链免疫吸附试验（ELISA）检测hRMEC细胞培养上清液中PGE2水平；蛋白免疫印迹法（
【机 构】
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南京医科大学附属无锡人民医院眼科 214023;东南大学附属中大医院眼科，南京 210009,南京医科大学附属无锡人民医院眼科 214023,南京医科大学附属无锡人民医院眼科 214023,南京医科大
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目的观察前列腺素E2 （PGE2）4种受体（EP1-4R）对高糖环境中人视网膜微血管内皮细胞（hRMEC）中炎症小体活化和细胞损伤作用。
方法将hRMEC分为正常组、高糖组，分别置于含5.5、30.0 mmol/L葡萄糖的Dulbecco改良Eagle培养基中培养。采用流式细胞仪观察高糖组、正常组的细胞凋亡率；酶链免疫吸附试验（ELISA）检测hRMEC细胞培养上清液中PGE2水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞环氧化酶2 （COX2）、EP1-4R的蛋白表达；实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测hRMEC中EP1-4R mRNA的表达。高糖组细胞培养后72 h后，将其再分为对照组、PGE2组、EP1-4R激动剂组、PGE2+EP1-4R抑制剂组、二甲基亚砜组。根据组别，各组给予相应的激动剂或抑制剂继续培养24 h。采用qRT-PCR检测各组细胞核苷酸结合寡聚化结构样受体蛋白（NLRP3 ）、白细胞介素（IL）-1β前体（pro-IL-1β）mRNA的表达；ELISA检测细胞培养上清液中IL-1β、乳酸脱氢酶（LDH）的含量；Western blot检测各组细胞活化的半胱氨酸天冬氨酸酶（Caspase）-1蛋白表达。同时对高糖环境的hRMEC给予IL-1β刺激24 h，检测其细胞培养上清液中LDH的活性。
结果高糖组hRMEC细胞凋亡率、COX2蛋白表达、PGE2蛋白含量较正常组明显升高，并呈时间依赖性。与正常组比较，高糖组hRMEC中EP1R、EP2R、EP4R蛋白及mRNA表达水平较正常组升高（P<0.05 ）。与对照组比较，PGE2组（t=4.627，P<0.01）、EP1-4R激动剂组（t=3.889、3.583、2.445、3.216，P<0.05 ）hRMEC中NLRP3 mRNA表达水平明显升高，差异有统计学意义；pro-IL-1β mRNA表达水平有所升高，但差异无统计学意义（PGE2组：t=1.807，P>0.05；EP1-4R激动剂组：t=1.807、1.477、0.302、1.926，P>0.05）。与PGE2组比较，PGE2+EP2R抑制剂组hRMEC中NLRP3 mRNA表达水平明显降低，差异有统计学意义（t=2.812，P<0.05）；PGE2+EP3R抑制剂组hRMEC中pro-IL-1β mRNA表达水平明显升高，差异有统计学意义（t=4.113，P<0.01）。PGE2组、EP1R激动剂组、EP2R激动剂组细胞培养上清液中IL-1β的蛋白含量较对照组明显升高，差异有统计学意义（t=5.155、4.136、4.817，P<0.01）；PGE2+EP2R抑制剂组和PGE2+EP4R抑制剂组细胞培养上清液中IL-1β的蛋白含量较PGE2组明显降低，差异有统计学意义（t=1.964、4.765，P<0.05）。PGE2组和EP2R激动剂组hRMEC中活化的Caspase-1蛋白表达较对照组明显增多，差异有统计学意义（t=5.332、4.889，P<0.05）；PGE2+EP2R抑制剂组hRMEC中活化的Caspase-1蛋白表达较PGE2组明显降低，差异有统计学意义（t=6.699，P<0.01 ）。PGE2组和EP2R激动剂组细胞培养上清液中LDH活性较对照组明显升高，差异有统计学意义（t=4.908、4.225，P<0.05）；PGE2+EP2R抑制剂组细胞培养上清液中LDH活性较PGE2组明显降低，差异有统计学意义（t=5.301，P<0.01 ）。与对照组比较，高糖环境hRMEC细胞培养上清液中LDH活性明显升高，差异有统计学意义（t=3.499，P<0.05 ）。
结论PGE2的4种受体对NLRP3及其效应分子均有不同程度活化作用，其中EP2R主要介导了高糖环境下hRMEC的损伤。
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