目的 探讨电穿孔方法介导编码可溶性血管内皮细胞膜受体sFlk-1和ExTek的真核表达质粒肿瘤内转移对视网膜母细胞瘤(RB)移植瘤生长的治疗效果及其作用机制.方法通过体内、外实验证实sFlk-1和ExTek对RB的抑制作用及其机制.(1)体外实验:以阳离子脂质体介导质粒pCI-sFlk-1转染人胚肾293细胞24 h后收集细胞培养液,分别按1∶ 1、2∶ 1、3∶ 1的比例与RPMI-1640培养基混合,补充胎牛血清至浓度为10%,培养RB细胞并绘制细胞生长曲线.(2)体内实验:将1×107个人RB细胞(HXO-Rb44)悬液接种至40只裸鼠右后腿皮下,建立RB移植瘤模型.治疗组将电穿孔技术介导表达质粒pCI-sFlk-1(15 μg)和pCI-ExTek(15 μg)联合导入瘤体后电击,对照组注射生理盐水后电击.每周1次,连续3次.从第1次治疗开始至第3次治疗后1周,期间每周测量肿瘤体积2次,绘制肿瘤生长曲线,计算抑瘤率.采用抗平滑肌肌动蛋白抗体免疫组织化学染色法确定治疗组和对照组肿瘤内微血管密度和肿瘤内血管内皮细胞生长因子(VEGF)及其受体Flk-1的表达.结果 sFlk-1对体外培养的RB细胞的生长无明显抑制作用.但在体内sFlk-1和ExTek联合应用能够显著抑制RB移植瘤的生长,抑瘤率为80.04%.治疗组平均微血管密度为(26.69±2.95)个/200倍视野,明显低于对照组(44.51±6.11)个/200倍视野,2组比较差异有统计学意义(P<0.05).尽管2组间VEGF染色强度无明显差别,但治疗组Flk-1的染色强度高于对照组. 结论电穿孔方法介导编码可溶性血管内皮细胞膜受体sFlk-1和ExTek的表达质粒导入RB肿瘤,可明显抑制肿瘤的生长,其作用机制为抑制肿瘤血管的生成。
电穿孔介导质粒DNA导入视网膜母细胞瘤抑制肿瘤生长的实验研究
【摘 要】
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目的 探讨电穿孔方法介导编码可溶性血管内皮细胞膜受体sFlk-1和ExTek的真核表达质粒肿瘤内转移对视网膜母细胞瘤(RB)移植瘤生长的治疗效果及其作用机制.方法通过体内、外实验证实sFlk-1和ExTek对RB的抑制作用及其机制.(1)体外实验:以阳离子脂质体介导质粒pCI-sFlk-1转染人胚肾293细胞24 h后收集细胞培养液,分别按1∶ 1、2∶ 1、3∶ 1的比例与RPMI-1640培养
【机 构】
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上海市第九人民医院眼科,200011,200080,上海交通大学医学院附属第一人民医院中心实验室,200080,上海交通大学医学院附属第一人民医院中心实验室,200080,上海交通大学医学院附属第一人
【发表日期】
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2005年41期
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