利用同源重组对酵母人工染色体左右臂进行多基因修饰

• 作 者: 刘丽荣 卢步峰 吕子卿 卢波 张小蕾 郭礼和
• 机 构: 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所,中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所,贵阳医学院
• 出 处: 细胞生物学杂志
• 发表日期: 2006年1期
• 关键词: 同源重组 酵母人工染色体:左右臂:多基因修饰 homologous recombination yeast artificial chromosomes arm
• 基金项目: 上海市科委重大项目（No.024319101）

构建携带哺乳动物细胞筛选基因和酵母人工染色体（YAC）同源序列的载体，利用酵母中能够发生高频率同源重组的特点对YAC分别进行左、右臂修饰，依次将NEO、EGFP及PURO基因定点整合到YAC左右臂上。用营养缺陷筛选的方法排除酵母发生突变或随机整合等情况后，用PCR及Southern杂交方法证实各筛选基因定点整合于YAC两臂上，从而获得携带3个哺乳动物细胞筛选基因的YAC克隆。并且由此建立了通过同源重组将哺乳动物标记基因定点引入YAC左右臂的多基因修饰平台。