LOX-shRNA慢病毒表达载体的构建与鉴定

• 作 者: 周蓓 吴慧恒 陈信良 董晓燕
• 机 构: 上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院妇科,同济大学附属同济医院妇产科,克拉玛依市中心医院妇产科
• 出 处: 同济大学学报：医学版
• 发表日期: 2017年1期
• 关键词: LOX基因 盆腔脏器脱垂 慢病毒载体 RNA干扰 LOX gene pelvic organ prolapse lentiviral vector RNA
• 基金项目: 国家自然科学基金（81571419）,上海交通大学医工交叉项目（YG2015MS40）

目的构建LOX-shRNA的慢病毒表达载体及其病毒包装鉴定。方法利用Oligo Designer 3．0，根据人LOX基因序列设计shRNA，并合成包含正、反义靶序列的互补DNA链，退火后插入LOX表达载体中，构建shRNA表达质粒，并转化至E．coli TOP10感受态细胞，抽提质粒后进行测序。将重组质粒转染HEK-293T细胞，应用RT—PCR检测各组LOX基因mRNA的表达水平，筛选出最有效的LOX—shRNA后，通过LipofectAMINE^TM2000介导转染293T细胞，对慢病毒进行包装并测