DNA大片段剪切技术研究进展

• 作 者: 敖朝晖 强伯勤
• 机 构: 中国医学科学院基础医学研究所,中国医学科学院基础医学研究所 北京 100005,北京 100005
• 出 处: 国外医学(分子生物学分册)
• 发表日期: 1992年04期
• 关键词: DNA 人基因组 限制性内切酶 限制酶 甲基化酶 识别序列 全序列测定 高特异性 BamHI 交叉保护

基因的研究已深入到对具有庞大分子量的高等生物基因组,尤其是人基因组的作图和全序列测定。在DNA大片段剪切中面临的问题是如何将10~9bp数量级的庞大基因组降解成100～1000kb范围的DNA片段。当前常用的方法是高特异性限制性内切酶(如Not I)的完全或部分降解作用,正在发展的DNA位点专一性的其他剪切技术,包括应用适宜甲基化酶对特定序列的甲基化作用创建Dpn I专一性识别位点,以及采用甲基化酶的交叉保护作用提高现有限制性内切酶的切割特异性等等。本文就近年来这方面的研究进展作简要综述。

Gene research has gone deep into the mapping and sequencing of the higher biological genomes with large molecular weights, especially the human genome. The problem in large DNA fragment shearing is how to degenerate a large genome of the order of 10-9 bp into DNA fragments in the range of 100-1000 kb. Current methods commonly used are complete or partial degradation of high-specific restriction endonucleases (eg, Not I), other cleavage techniques that are evolving DNA site-specific, including the use of suitable methylase for specific sequences Methylation of Dpn I to create a unique recognition site, and the use of methylation of the cross-protection to improve the cutting specificity of existing restriction enzymes and so on. This article gives a brief overview of the research progress in this area in recent years.