【摘 要】
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本研究旨在克隆绵羊SUN2(Sad1 and UNC84 domain containing 2)基因并进行生物信息学分析,构建真核表达载体并检测其在A549细胞中的表达.根据绵羊SUN2基因序列(GenBank登录号:XM_015095026.2)设计特异性引物,应用RT-PCR方法扩增并克隆绵羊SUN2基因CDS序列,测序鉴定后对其进行生物信息学分析,并构建pEGFP-C1-SUN2重组质粒.利用脂质体转染方法将pEGFP-C1-SUN2重组质粒转染至A549细胞并检测其表达.结果 显示,绵羊SUN2
【机 构】
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内蒙古农业大学兽医学院,呼和浩特010018;农业部动物临床诊疗技术重点实验室,呼和浩特010018;内蒙古自治区基础兽医学重点实验室,呼和浩特010018
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本研究旨在克隆绵羊SUN2(Sad1 and UNC84 domain containing 2)基因并进行生物信息学分析,构建真核表达载体并检测其在A549细胞中的表达.根据绵羊SUN2基因序列(GenBank登录号:XM_015095026.2)设计特异性引物,应用RT-PCR方法扩增并克隆绵羊SUN2基因CDS序列,测序鉴定后对其进行生物信息学分析,并构建pEGFP-C1-SUN2重组质粒.利用脂质体转染方法将pEGFP-C1-SUN2重组质粒转染至A549细胞并检测其表达.结果 显示,绵羊SUN2基因CDS区序列全长2187 bp,编码728个氨基酸,理论分子质量为81.06 ku,分子式为C3593 H5639 N1031 O1110 S14,等电点(pI)为6.20,总原子数为11387,不稳定系数为56.88,属于不稳定蛋白.绵羊SUN2基因序列与山羊、牛、猪、马、家犬、大鼠、小鼠及人的相似性分别为98.9％、97.2％、91.6％、90.6％、87.1％、82.4％、82.1％和86.1％,不同物种间基因相似性较高,进化过程中相对保守.系统进化树分析表明,绵羊SUN2基因与山羊、牛、猪、马和家犬等哺乳动物的遗传距离相对较近,与鸡的遗传距离较远.结构域及跨膜结构域预测显示,绵羊SUN2蛋白含有1个高度保守的SUN结构域,且存在跨膜结构域.信号肽预测显示其不存在信号肽位点,疏水性分析为亲水性蛋白,氨基酸序列二级结构主要为α-螺旋(51.65％),其余为无规则卷曲(31.46％)、延伸链(12.36％)和β-转角(4.53％).试验成功构建了绵羊SUN2基因真核表达载体pEGFP-C1-SUN2,将其转染至A549细胞并检测到蛋白表达.本试验结果为绵羊SUN2基因功能的研究提供了参考依据,为后续探究SUN2基因在绵羊肺腺瘤病中的作用奠定了基础.
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