无选择标记的植物表达载体的构建

• 作 者: 辛翠花 刘庆昌 屈冬玉 黄三文
• 机 构: 中国农业大学农学与生物技术学院,中国农业科学院蔬菜花卉研究所
• 出 处: 园艺学报
• 发表日期: 2008年5期
• 关键词: 无标记转化 载体构建 转基因 番茄 marker-free transformation vector construction transgene
• 基金项目: 国家自然科学基金项目（30671319）,中荷园艺作物基因组分析联合实验室运行项目（1251601001）,国家重点基础研究发展计划项目（2006cb101907）,中荷战略联盟项目（2004CB720405）

以双元载体pBINPLUS为基础，在T-DNA侧翼区通过2次特异PCR、酶切和连接相结合的方法，构建了1个无标记载体pBINMF（marker-freevector）。通过酶切后测序分析，这个无标记载体在T-DNA左、右边界之间只有1个多克隆位点（multipleclonedsites，MCS）。为了验证该载体的遗传稳定性，将gus基因克隆到该载体上并通过农杆菌介导的方法转化番茄栽培品种‘Moneymaker’，特异PCR扩增目的基因和GUS组织染色结果表明，gus基因已经整合进入番茄基因组并得以表达。该