【摘 要】
：
目的 构建与海肾荧光素酶(Rluc)融合的人Neurotensin-R1(Human Neurotensin receptor1,NTS1 or NTSR1)真核表达载体,用于生物发光共振能量转移法检测人NTS与其它受体间的相互
【基金项目】
：
山东省自然科学基金;国家自然科学基金
论文部分内容阅读
目的 构建与海肾荧光素酶(Rluc)融合的人Neurotensin-R1(Human Neurotensin receptor1,NTS1 or NTSR1)真核表达载体,用于生物发光共振能量转移法检测人NTS与其它受体间的相互作用以及研究Neurotensin-R介导的细胞内信号转导机制.方法 以质粒pcDNA3.1-hNTS1为模板,PCR方法扩增人NTS.扩增的人NTS以及质粒pRluc-pcDNA3.1用Not Ⅰ和Xba Ⅰ双酶切,然后将这2种酶切产物按常规方法连接、转化至大肠杆菌Top10中,该菌在培养箱中孵育12 ～ 16h后,挑取菌落培养,提取质粒,进行酶切鉴定,最后进行测序.将测序正确的重组载体用脂质体法转染人胚胎肾(human embryonic kidney293,HEK293)细胞.最后,通过共聚焦显微镜观察经过免疫荧光染色的细胞以及Western blot鉴定人Neu-rotensinl-R的表达.结果 通过PCR扩增出一条1257bp的基因片段,序列与GenBank (NM_002531)相同.Western blot中大约90kDa处有一蛋白条带,与预期大小相同.人Neurotensin-R表达在细胞膜上.结论 成功构建了pRluc-hNeurotensinl-R重组表达载体,建立了该质粒转染HEK293的细胞模型.可被用于检测与其它受体间的相互作用以及研究Neurotensin1-R介导的细胞内信号转导机制,这将有助于探究疾病的发病机制及开发新的药物靶点.
其他文献
An R2R3 MYB gene,PeMYBL1,was isolated from male inflorescence of Populus×euramericana by homologous cloning combined with in silico cloning techniques.The full
能量代谢是指三大营养物质在体内代谢过程中伴随的能量产生和利用过程。肿瘤本身的作用、机体对肿瘤的反应以及抗肿瘤治疗使肿瘤患者的代谢具有特殊性。通常认为,初诊肿瘤患
研究探讨通过植物吸收来修复铀污染的可能性.首先采用"无样地取样法"对南方某铀矿植物群落进行调研,再用"5Br-PADAP显色目视比色法"研究并测定了从中筛选到的芒、狗尾草、鬼
[目的]研究景观水体的生物修复技术.[方法]采用SBR反应器,通过间歇曝气方式对底泥体系中好氧反硝化细菌进行了选择和富集,分离到1株异养硝化菌,并根据其生理生化性状和部分长
建立了水质与静态水量、动态水资源量、社会经济和生态环境相结合的区域水环境质量综合权重评价新方法,即用动态水量权重、社会经济权重和生态环境权重之和作为综合权重,根据
为了探究热解温度对生物炭修复重金属污染土壤的影响,将300℃,500℃和700℃下制备的生物炭加入铅(Pb)和镉(Cd)污染土壤进行培养,检测重金属形态的变化.结果表明,加入生物炭培
目的 探讨液压转基因技术(HDT)应用于大鼠脂肪肝转基因的条件、方法.方法 以不同速度将不同体积、浓度的绿色荧光蛋白基因质粒pEGFP-C1一次性注射到脂肪肝大鼠尾静脉,于注射
运用“3414”回归试验设计研究不同氮、磷、钾肥料施肥量配比对莲子产量的影响,建立了相应的施肥模型,探讨分析确定了子莲配方施肥养分适宜用量的方法.结果表明:所试田块及其
采用分层挖掘法对新疆阿克苏市枣—冬小麦间作系统中果树和作物根系空间分布特征进行分析.结果表明,枣树吸收根根量在垂直方向主要集中在0～80 cm土层,占总量73.11％,水平方向主
利用干旱棚,以洛阳1971～1999年20年的降雨量为依据,以每月占年平均降雨量的加权值进行分配,模拟不同水肥条件下对小麦产量及淀粉特性的影响。结果表明:不同降雨年型不同施肥组