【摘 要】
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斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型( SpltMNPVⅡ)分离株是繁殖率和毒力极强的新型病毒株,ORF63是该病毒分离株的一个功能未知基因.从SpltMNPVⅡ分离株基因组中克隆了ORF63.序列分析
【机 构】
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山东农业大学林学院,中国农业科学院生物技术研究所
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斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型( SpltMNPVⅡ)分离株是繁殖率和毒力极强的新型病毒株,ORF63是该病毒分离株的一个功能未知基因.从SpltMNPVⅡ分离株基因组中克隆了ORF63.序列分析表明,该基因读码框为1 071 bp,编码356个氨基酸,蛋白质分子质量为41.3 kD;起始密码子ATG上游存在一个早期和晚期启动子基序,编码蛋白序列含有CNX、MutH等多种结构域.启动子活性和转录时相分析表明ORF63是一个早、晚期表达的基因,在病毒感染4h和18 h时有2个转录峰,24h以后转录水平略有下降,但总体趋于稳定.构建该基因的原核表达载体pET-28a-ORF63,并转化大肠杆菌BL21 (DE3),表达并纯化融合蛋白后制备多克隆抗体,Western blot检测制备的多克隆抗体特异性较好,效价可达1∶3 200以上.由以上结果推测,SpltMNPVⅡ分离株的ORF63基因是一个早期和晚期均有表达的病毒基因,可能与SpltMNPVⅡ感染宿主细胞后自身DNA的复制有关,参与早期芽生病毒(BV)的发生和晚期包涵体衍生病毒(ODV)的成熟2个过程.
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