【摘 要】
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以 PCR技术扩增含有 Pre- C信号肽序列及完整的 HBe Ag基因序列 (即 HBc Ag基因5′端 447bp) ,克隆至家蚕核多角体病毒转移载体 p Bm0 30 ,与野生型 Bm NPV DNA共转染家蚕Bm
【机 构】
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南京军区后勤部军事医学研究所!南京210002,南京军区后勤部军事医学研究所!南京210002,南京军区后勤部军事医学研究所!南京210002,武汉大学病毒研究所!武汉430072,南京军区后勤部军事
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以 PCR技术扩增含有 Pre- C信号肽序列及完整的 HBe Ag基因序列 (即 HBc Ag基因5′端 447bp) ,克隆至家蚕核多角体病毒转移载体 p Bm0 30 ,与野生型 Bm NPV DNA共转染家蚕Bm N细胞 ,空斑纯化后得重组病毒。研究结果表明 Bm N细胞能正确识别与切割 HBe Ag信号肽序列 ,所表达的 HBe Ag效价高 ,纯度好 ,ELISA法测得培养上清中 HBe Ag效价达 1∶ 32 0 0 0。上清经过 Sephacry1 S- 2 0 0和 DEAE- Sepharose FF两步纯化 ,得到电泳纯 HBe Ag。
PCR was used to amplify the sequence of Pre-C signal peptide and complete HBeAg gene (ie, 447bp at the 5 ’end of HBc Ag gene), cloned into the silkworm polyhedrosis vector pBm030, and co-cultured with wild-type Bm NPV DNA BmN transfected silkworm cells, plaque purified recombinant virus. The results showed that BmN cells can correctly identify and cleave the HBeAg signal peptide sequence, the expressed HBeAg titer is high, the purity is good, and the HBeAg titer in the culture supernatant obtained by ELISA is up to 1: 3200. The supernatant was purified by two steps of Sephacryl S-200 and DEAE-Sepharose FF to obtain electrophoretic pure HBe Ag.
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