筋伤活络搽剂薄层鉴别研究

来源 :中国中西医综合临床杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ljkstar007
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  【摘要】目的:建立筋伤活络搽剂的薄层色谱(TLC)鉴别方法,为控制其产品质量提供依据。方法:采用薄层色谱(TLC)法对方中的三七、薄荷、栀子、没药、红花、白芷、姜黄制定了定性鉴别;对川乌建立了乌头碱限量检查标准。结果:薄层图谱斑点清晰,阴性对照无干扰。结论:方法简便、准确、重现性和分离度好,可用于筋伤活络搽剂的薄层鉴别质量控制。
  【关键词】筋伤活络搽剂 薄层色谱法 乌头碱限量检查 质量标准
  【Abstract】Objective:To establish TLC method for Jinshang HuoluoLiniment. Methods:Radix et Rhizoma Notoginseng,Herba Menthae,Fructus Gardeniae,Myrrha,Flos Carthami,Radix Angelicae Dahuricae,Rhizoma Curcumae Longae in Jinshang HuoluoLiniment were identified by TLC method;To establish the quality standard for Limit of the Aconitine quantity check. Results:The TLC sports developed is fairly clear,and the blank test showed no interference. Conclusion:The method is simple、accurate and with good repeatability and was not interfered by other constituents in the prescription. It can be used for the quality control of Jinshang HuoluoLiniment.
  【Key words】Jinshang HuoluoLinimentTLCLimit of the Aconitine quantity checkQuality standard
  筋伤活络搽剂由三七、薄荷、栀子、乳香、没药、红花、白芷、姜黄、川乌、地黄、松节、白附子、樟脑等十三味中药组成,是我院使用多年的医院制剂。具有舒筋活血,消肿止痛的功效,主用于跌打损伤,骨折久伤不愈所致的局部肿胀疼痛等症的治疗。此制剂原无质量标准,为了确保产品质量,我们采用薄层色谱法对制剂中的三七、薄荷、栀子、没药、红花、白芷、姜黄进行了定性鉴别,并建立了其中川乌药材所含乌头碱的限量检查方法。实验结果稳定,重现性好,现报道如下。
  1仪器与试药
  仪器:ZF-1型三用紫外分析仪(上海市顾村仪器厂);定量毛细管(美国Drummond Co.);939薄层制板器(重庆南岸贝尔德仪器技术厂);ZFQ-85A旋转蒸发器(上海医械专机厂);CX-100超声波清洗器(北京医疗设备二厂);硅胶G(青岛海洋化工厂);羧甲基纤维素纳(上海化学试剂采购站);人参皂苷Rg1、Rb1和三七皂苷R1对照品;乌头碱对照品;栀子苷对照品;薄荷脑对照品;没药、红花、薄荷、姜黄、白芷对照药材;均由中国药品生物制品检定所提供;筋伤活络搽剂为本院自制;其它试剂均为分析纯。
  2薄层鉴别
  2.1三七的鉴别[1]:取本品50ml,置水浴上蒸至约20ml,放冷,移至分液漏斗中,用三氯甲烷20ml振摇提取,弃去三氯甲烷液,水液用水饱合的正丁醇振摇提取3次(20ml、20ml、10ml),合并正丁醇液,用水洗涤2次,每次20ml,分取正丁醇液置水浴上蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;取缺三七的筋伤活络搽剂50mL,同法制成阴性对照溶液;另取人参皂苷Rb1、Rg1及三七皂苷R1对照品,加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录Ⅵ B)试验,吸取上述供试品溶液和阴性对照溶液各5μl,对照品溶液2μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃下加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;置紫外光灯(365nm)下检视,显相同的荧光斑点。阴性对照无干扰(见图1)。
  
  1. 供试品2. 人参皂苷Rb1、Rg1、三七皂苷R1对照品3.阴性对照
  2.2薄荷的鉴别:取本品50ml,置水浴上蒸至约30ml,放冷,加石油醚(60℃~90℃)振摇提取2次,每次20ml,合并石油醚液,挥干,残渣加石油醚(60℃~90℃)2ml使溶解,作为供试品溶液;取缺薄荷的筋伤活络搽剂,同法制成阴性对照溶液;另取薄荷对照药材3g,加石油醚(60℃~90℃)20ml,超声处理20分钟,滤过,滤液挥干,残渣加石油醚(60℃~90℃)1ml使溶解,作为对照药材溶液;再取薄荷脑对照品,加石油醚(60℃~90℃)制成每1ml含2mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录Ⅵ B)试验,吸取上述供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各3μl,对照药材溶液10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以苯-乙酸乙酯(19∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以2%香草醛硫酸试液-乙醇(2∶8)的混合溶液,在100℃下加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材及对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰(见图2)。
  


  1. 供试品2. 薄荷对照药材3. 薄荷脑对照品 4. 阴性对照
  2.3栀子的鉴别[2]:取本品50ml,置水浴上挥去乙醇,用乙醚振摇提取2次,每次20ml,弃去乙醚液,水层用乙酸乙酯振摇提取3次(20ml、20ml、10ml),合并提取液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;取缺栀子的筋伤活络搽剂,同法制成阴性对照溶液;另取栀子苷对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录Ⅵ B)试验,吸取上述三种溶液各5μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以丙酮-乙酸乙酯-甲酸-水(4∶6∶0.5∶0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃下加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰(见图3)。
  
  1.供试品 2. 栀子苷对照品3.阴性对照
  2.4没药的鉴别:取本品30mL,置水浴上挥去乙醇,加入硅藻土3g,水浴上蒸干,残渣加乙醇10mL,置于60℃水浴上温浸1小时,滤过,滤液浓缩至约2ml,作为供试品溶液;取缺没药的筋伤活络搽剂,同法制成阴性对照溶液;另取没药对照药材0.5g,加乙醇5ml,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录Ⅵ B)试验,吸取上述供试品溶液和阴性对照溶液各5~10μl,对照药材溶液3μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以环已烷为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸-乙醇(2∶8)溶液。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的红色斑点。阴性对照无干扰(见图4)。
  
  1.供试品 2. 没药对照药材3.阴性对照
  2.5红花的鉴别:取本品50ml,置水浴上浓缩至约20ml,放冷,用乙酸乙酯振摇提取2次,每次20ml,合并乙酸乙酯液,用无水硫酸钠脱水,滤过,滤液蒸干,残渣加乙酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液;取缺红花的筋伤活络搽剂,同法制成阴性对照溶液;另取红花对照药材1g,加水100ml,煮沸30分钟,放冷,滤过,滤液置水浴上浓缩至20ml,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录Ⅵ B)试验,吸取上述三种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-乙醚(3∶2)为展开剂,展开,取出,晾干,在氨蒸气中熏约10分钟,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。阴性对照无干扰(见图5)。
  
  1.供试品2.红花对照药材 3. 阴性对照(365nm紫外光灯下)
  2.6白芷的鉴别[3]:取本品30mL,用石油醚(30℃~60℃)振摇提取2次,每次30mL,合并提取液,低温蒸干,残渣加乙酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液;取缺白芷的筋伤活络搽剂,同法制成阴性对照溶液;另取欧前胡素对照品,加乙酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录Ⅵ B)试验,吸取上述三种溶液各5μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以石油醚(30℃~60℃)-乙醚(3∶2)为展开剂,在25℃以下展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。阴性对照无干扰(见图6)。
  


  1.供试品2.欧前胡素对照品 3. 阴性对照(365nm紫外光灯下)
  2.7姜黄的鉴别:取本品50mL,置水浴上挥去乙醇,加入硅藻土3g,水浴上蒸干,加乙醇50ml,加热回流1小时,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇2ml使溶解,作为供试品溶液;取缺姜黄的筋伤活络搽剂,同法制成阴性对照溶液;另取姜黄对照药材1g,加乙醇20ml,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录Ⅵ B)试验,吸取上述供试品溶液和阴性对照溶液各5μl,对照药材溶液2μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-甲醇-甲酸(96∶4∶0.7)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以浓盐酸溶液。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显三个酱红色的斑点。阴性对照无干扰(见图7)。
  
  1. 供试品 2.姜黄对照药材 3.阴性对照
  3乌头碱限量检查[4]
  取本品100ml,置水浴上蒸至约50ml,放冷,加稀盐酸调pH值为 1~2,用乙醚振摇提取3次(30 ml、30ml、20ml);酸水液加浓氨水调pH 值为9~10,再用乙醚振摇提取4次(25ml、20ml、15ml、10ml);合并乙醚提取液,用适量无水硫酸钠脱水,滤过,滤液回收乙醚至干,残渣加无水乙醇2ml使溶解,作为供试品溶液。另取乌头碱对照品,加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录Ⅵ B)试验,吸取上述供试品溶液6μl,对照品溶液5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,在另一槽内加入浓氨水饱合后,以正已烷-乙酸乙酯-乙醇(6.4∶3.6∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以改良碘化铋钾试液,置日光下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,出现的斑点应小于对照品斑点或不出现斑点。
  4讨论
  4.1本品组方较复杂,相互干扰因素多,经过反复实验,试用多种展开系统和纯化方法,摸索出方中三七、薄荷、栀子、没药、红花、白芷、姜黄七味药的薄层鉴别方法。这些方法分离度高,重现性好,专属性强,可有效地控制制剂质量。
  4.2由于该制剂中药材川乌含有毒性成分乌头碱,本品虽属外用,但为安全起见,故制定了乌头碱的限量检查质量标准。经对多批次筋伤活络搽剂的试验,供试品色谱中出现的斑点均小于对照品斑点或不出现斑点。
  
  参考文献
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  作者单位:400020重庆市江北区中医院
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