条斑紫菜酵母双杂交文库的构建及PyMAPK5互作蛋白的筛选

• 作 者: 董道英 孔凡娜 崔正彩 孙斌
• 机 构: 中国海洋大学海洋生命学院海洋生物遗传学与育种教育部重点实验室
• 出 处: 海洋与湖沼
• 发表日期: 2019年6期
• 关键词: PyMAPK5 条斑紫菜 酵母双杂交 互作蛋白 逆境胁迫 PyMAPK5 Pyropia yezoensis yeast two-hybrid interact
• 基金项目: 国家自然科学基金项目,31672641号

为进一步研究条斑紫菜促分裂原活化激酶家族PyMAPK5的下游互作蛋白,理解其生物学功能,本研究通过酵母双杂交的方法进行其相互作用蛋白的筛选。提取不同温度和失水逆境胁迫下的RNA,利用Invitrogen体系构建条斑紫菜酵母双杂交cDNA文库,其库容为1.44×107CFU,重组率为91.8%。以pGBKT7-PyMAPK5为诱饵蛋白载体,利用共转化方法,从文库中筛选得到26个与PyMAPK5互作的候选蛋白。候选蛋白集中在光系统II相关蛋白、捕光蛋白、微管蛋白、ATP酶、GTP结合蛋白及假设蛋白等