【摘 要】
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目的 探讨醒脑静抑制细胞自噬过度激活与高迁移率族蛋白B1(High mobility group protein box 1,HMGB1)的相关性.方法 将HMGB1启动子转染至PC12细胞,用双荧光素酶报告基因系统
【机 构】
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江西中医药大学,江西南昌330004;广西中医药大学第一附属医院,广西南宁530023;广西江滨医院,广西南宁530021
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目的 探讨醒脑静抑制细胞自噬过度激活与高迁移率族蛋白B1(High mobility group protein box 1,HMGB1)的相关性.方法 将HMGB1启动子转染至PC12细胞,用双荧光素酶报告基因系统检测其转录活性.检测醒脑静在血清饥饿法诱导下HMGB1基因启动子转录活性.通过线栓法建立大鼠右侧短暂性大脑中动脉(transient middle cerebral artery occlu-sion,tMCAO)阻塞模型.随机将大鼠分为7组:正常组、模型组、醒脑静组、自噬抑制剂3-MA组、自噬诱导剂雷帕霉素组、醒脑静+自噬抑制剂3-MA组、醒脑静+自噬诱导剂雷帕霉素组,正常组只分离血管,不进行任何操作.分别在tM-CAO术后2h、再灌注后、给药前及给药24h后对大鼠进行神经功能评分.给药24h后,透射电镜观察伤侧大脑皮层自噬的超微结构变化,取大鼠伤侧大脑皮质,用免疫印迹法检测HMGB1蛋白表达.结果 醒脑静对HMGB1基因启动子转录活性具有明显的抑制作用.再灌注后大鼠神经功能缺损评分高于tMCAO术后2h(P＜0.05);与给药前相比,给药后24h醒脑静组、3-MA组、醒脑静+3-MA组的神经功能缺损评分降低(P＜0.05),雷帕霉素组、醒脑静+雷帕霉素组,P＞0.05,差异无统计学意义.透射电镜结果显示在脑缺血再灌注24h后伤侧大脑皮层细胞自噬增强.免疫印迹法检测结果显示,与正常组相比,模型组HMGB1蛋白表达明显增加,醒脑静组HMGB1蛋白表达比3MA组、雷帕霉素组更显著,醒脑静+3-MA组与3-MA组对比,HMGB1蛋白表达降低更明显,醒脑静+雷帕霉素组与雷帕霉素组相比,醒脑静+雷帕霉素组抑制HMGB1蛋白表达更显著.结论 醒脑静可能通过下调HMGB1的蛋白表达来抑制细胞自噬作用.
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