【摘 要】
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目的探讨有效靶向人表皮生长因子受体(EGFR)基因siRNA质粒表达载体的构建及其慢病毒包装。方法针对人EGFR基因的3个亚型同源区设计siRNA序列并进行siRNA表达载体的构建;然后
【机 构】
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苏州大学附属第一医院泌尿外科,宁波市李惠利医院泌尿外科,
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目的探讨有效靶向人表皮生长因子受体(EGFR)基因siRNA质粒表达载体的构建及其慢病毒包装。方法针对人EGFR基因的3个亚型同源区设计siRNA序列并进行siRNA表达载体的构建;然后转染HT1080细胞,荧光实时定量PCR筛选出最有效的siRNA序列,再进行慢病毒颗粒的包装和生产,同时检测体内抑瘤效率。结果针对人EGFR基因成功设计了siRNA序列并构建了siRNA表达载体。2号EGFR siRNA序列对目的基因EGFR的抑制最为明显,抑制率达92.2%,显著高于1号的69.75%和3号的31.80%,差异有高度统计学意义(P<0.01)。72 h后2号EGFR siRNA细胞感染率稳定在75%以上,病毒滴度为1.3412×105 ifu/μl,体内对前列腺癌细胞系PC-3移植瘤生长抑制率达34.83%,明显高于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论针对人EGFR基因最有效的siRNA表达载体质粒的构建、鉴定和慢病毒包装,为其研究肿瘤靶向基因治疗奠定了基础。
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