【摘 要】
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目的 利用AdMax包装系统构建性别决定区Y框蛋白9(SOX9)基因重组腺病毒载体并对其进行鉴定.方法 应用聚合酶链反应(PCR)对SOX9基因进行扩增,重组入线性化的pAV-MCMV-绿色荧光蛋白(GFP)-FLAG,后转化人DH5a感受态细胞,得到的转化子用菌落PCR进行鉴定,鉴定无误后,通过AdMax腺病毒包装系统转染HEK293细胞,并在其中包装成熟、扩增.用Western blot法对S
【机 构】
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目的 利用AdMax包装系统构建性别决定区Y框蛋白9(SOX9)基因重组腺病毒载体并对其进行鉴定.方法 应用聚合酶链反应(PCR)对SOX9基因进行扩增,重组入线性化的pAV-MCMV-绿色荧光蛋白(GFP)-FLAG,后转化人DH5a感受态细胞,得到的转化子用菌落PCR进行鉴定,鉴定无误后,通过AdMax腺病毒包装系统转染HEK293细胞,并在其中包装成熟、扩增.用Western blot法对SOX9基因重组腺病毒进行检测,并把获得的病毒DNA进行PCR鉴定和滴度测定.结果 获得的病毒DNA进行PCR鉴定,得到1 565 bp的片段,大小与SOX9基因相一致,证实SOX9基因片段已经重组进入腺病毒.Western blot检测中,在72×103～95×103间可见大小与SOX9-GFP-Flag的融合蛋白(86×103)相吻合的阳性条带,病毒滴度为2.3×1011 PFU/ml,表明SOX9蛋白成功表达.结论 成功建立安全、稳定、有效的SOX9基因重组腺病毒载体。
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