L-山梨糖还原酶基因在大肠杆菌中的表达及融合蛋白的酶学特性

• 作 者: 刘耀平 张丹 周亚凤 徐明凯 张成冈4
• 机 构: 中国科学院沈阳应用生态研究所沈阳110015,中国科学院武汉病毒所武汉430071
• 出 处: 应用与环境生物学报
• 发表日期: 2004年3期
• 关键词: 葡萄糖酸杆菌基因文库 L-山梨糖还原酶 酶学特性 固定化金属亲和层析技术 genomic library of Gluconobacter sp. Lsorb
• 基金项目: 沈阳市重大科技项目(No.2002100100)~~

为获得L-山梨糖还原酶(SR)整个操纵子序列，以pGEM-3zf(+)作为载体构建了Gluconobacter sp．S6基因文库．结合转化子在以L-山梨糖为唯一碳源培养基上的生长情况，利用PCR技术筛选到一个含L-山梨糖还原酶基因的阳性克隆pGEM．3zf(+)-sr3／E．coli，酶切鉴定插入片断长度约5．0kb左右．以pGEM-3zf(+)-sr3／E．coli质粒DNA为模板，扩增SR结构基因．PCR产物经测序验证为SR基因序列后，与表达载体Pet32a(+)相连，转化宿主大肠杆菌AIM94(D