原癌基因Pim-3对烧伤及内毒素引起的肠黏膜损伤保护作用的实验研究

• 作 者: 陈建勇 沈学文 张吉翔
• 机 构: 330006,南昌大学第二附属医院消化科,江西省分子医学重点实验室,330006,南昌大学第二附属医院消化科,江西省分子医学重点实验室,330006,南昌大学第二附属医院消化科,江西省分子医学重点实验
• 出 处: 中华医学杂志
• 发表日期: 2007年87期
• 关键词: 细胞培养 烧伤 脂多糖类 肠黏膜 Pim-3

目的 研究Pim-3基因在烧伤及内毒素引起的肠黏膜损伤中的保护作用.方法 体内实验在成年Wistar大鼠中进行,分为A组(烧伤组),B组(脂多糖组),C组(正常对照组).各组依次在处理后3、6、12、24、48 h取小肠,提取总RNA及蛋白质,并进行逆转录(RT)-PCR及Western印迹分别检测内源性Pim-3、细胞间黏附分子(ICAM-1)、紧密连接蛋白闭锁蛋白(occludin)在肠道的表达.观察烧伤和内毒素对内源性Pim-3基因在肠道表达的影响及Pim-3基因与肠黏膜损伤的相关性.体外实验部分,首先原代肠上皮细胞分离培养,再重组质粒pEGFP-N2/Pim-3转染和内毒素处理原代肠上皮细胞.实验分为6组:①正常对照+内毒素处理组(5 μg/ml);②空载质粒pEGFP-N2转染+内毒素处理组(5 μg/ml);③重组质粒pEGFP-N2/Pim-3转染+内毒素处理组(5 μg/ml);④正常对照组;⑤空载质粒pEGFP-N2转染组;⑥重组质粒pEGFP-N2/Pim-3转染组;内毒素处理6 h后,提取各组总RNA,利用逆转录(RT)-PCR检测各指标,并利用流式细胞仪观察各组细胞凋亡情况.结果 (1)体内实验部分:A、B组内源性Pim-3基因在3 h表达开始增多,分别为C组的(12.25±1.01)和(15.08±1.07)倍,6 h到达顶点,分别为C组的(21.13±1.78)和(25.24±1.80)倍,以后逐渐减少.A、B组ICAM-1在6 h后一直处于高表达的位置,12 h达高峰,分别为C组的(88±7)和(58±5)倍,差异有统计学意义(P《0.05).A、B组闭锁蛋白在3 h表达开始增多,6 h达顶点,分别为C组的(6.65±0.24)和(6.25±0.26)倍,差异均有统计学意义(均P《0.05).(2)体外实验部分:⑥组的Pim-3及闭锁蛋白的表达与④⑤组之间的差异均有统计学意义(均P《0.05),而④⑤⑥组之间ICAM-1表达及细胞凋亡差异无统计学意义.③组Pim-3、闭锁蛋白和ICAM-1的表达及细胞凋亡与①②组之间的差异有统计学意义(P《0.05).另外,①②③组的ICAM-1表达与④⑤⑥组之间的差异有统计学意义(P《0.05).结论 原癌基因Pim-3不但能抑制肠上皮细胞凋亡,而且还能够增强闭锁蛋白的表达,抑制脂多糖引起的肠道局部炎症反应,从而达到保护肠道机械屏障的作用。