探讨靶向RhoA基因的短发夹状RNA (sh RNA) 对卵巢上皮性癌 (卵巢癌) 裸鼠移植瘤的影响及可能的抗肿瘤作用机制。
方法建立卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型,应用随机数字表法将荷瘤裸鼠随机分为3组,即实验组 (予携带靶向Rho A基因的shRNA慢病毒液治疗) 、阴性对照组 (予携带针对随机无关序列的shRNA慢病毒液治疗) 、空白对照组 (予磷酸盐缓冲液),比较3组裸鼠的移植瘤生长情况,包括移植瘤生长速度、肿瘤体积、肿瘤质量;光镜下观察3组裸鼠移植瘤及主要器官组织的病理形态学特征。采用实时荧光定量PCR技术、免疫组化SP法和蛋白印迹法检测移植瘤组织中Rho A mRNA和蛋白的表达;脱氧核苷酸末端转移酶介导的核苷酸缺口末端标记 (TUNEL) 法检测3组裸鼠移植瘤细胞的凋亡情况[以凋亡指数 (AI) 表示]。
结果(1) 自治疗开始的第9天起,实验组裸鼠移植瘤的生长速度滞后于阴性对照组和空白对照组,差异均有统计学意义 (P<0.01) 。治疗结束后10 d,实验组裸鼠的移植瘤体积为 (338±114) mm3,小于阴性对照组和空白对照组[分别为 (1190±332) 和 (1101±396) mm3],分别比较,差异均有统计学意义 (P<0.01) ;实验组裸鼠平均肿瘤质量为 (0.23±0.11) g,低于阴性对照组和空白对照组[分别为 (0.79±0.19) 、 (0.74±0.17) g],分别比较,差异均有统计学意义 (P<0.01) 。而阴性对照组裸鼠移植瘤的生长速度、移植瘤体积、肿瘤质量分别与空白对照组比较,差异均无统计学意义 (P>0.05) 。光镜下观察,实验组肿瘤细胞呈大片坏死区域且核固缩多见,而阴性对照组和空白对照组肿瘤细胞无明显变化。 (2) 实验组裸鼠移植瘤组织中,Rho A mRNA的表达水平为0.30±0.05,低于阴性对照组的0.95±0.06和空白对照组的1.00±0.11,分别比较,差异均有统计学意义 (P<0.01) ;Rho A蛋白的表达水平为0.14±0.06,低于阴性对照组的0.78±0.14和空白对照组的0.75±0.13,分别比较,差异均有统计学意义 (P<0.01) ;实验组肿瘤细胞的AI为 (20.9±3.4) %,高于阴性对照组的 (5.2±2.0) %和空白对照组的 (6.0±2.1) %,分别比较,差异均有统计学意义 (P<0.01) 。而阴性对照组裸鼠移植瘤组织中Rho A mRNA和蛋白的表达水平及AI分别与空白对照组比较,差异均无统计学意义 (P>0.05) 。
结论靶向Rho A基因的sh RNA在体内有效下调卵巢癌裸鼠皮下移植瘤组织中RhoA基因的表达,抑制卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的生长,其机制可能与促进细胞凋亡有关。