【摘 要】
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目的 克隆人胰腺组织激肽原酶基因 ,构建分泌型原核表达载体。方法 使用RT PCR的方法扩增人胰腺组织cDNA ,从中扩增出激肽原酶基因。将扩增的激肽原酶基因用XhoⅠ和EcoRⅠ
【机 构】
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暨南大学医学院第二附属医院-深圳市人民医院
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目的 克隆人胰腺组织激肽原酶基因 ,构建分泌型原核表达载体。方法 使用RT PCR的方法扩增人胰腺组织cDNA ,从中扩增出激肽原酶基因。将扩增的激肽原酶基因用XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切后 ,连接到同样双酶切处理的pET 2 0b(+)载体上 ,酶切鉴定后 ,进行核苷酸序列分析和融合蛋白的表达。结果 将IPTG诱导表达的菌体进行SDS PAGE ,在相对分子质量 31 .4× 1 0 3处可见明显的高表达带。蛋白质免疫印迹实验表明 ,重组蛋白具有激肽原酶的抗原性。结论 成功克隆人胰腺组织激肽原酶基因 ,并高效表达融合蛋白 ,为进一步开发基因工程药物打下基础
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