【摘 要】
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乙型肝炎病毒(HBV)基因组各开放阅读框高度重叠,因此构建可在体外细胞模型中复制的HBV DNA质粒至少要包含1.1倍以上的HBV基因组.构建HBV1.1倍体复制子的传统克隆方法涉及多步
【机 构】
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厦门大学公共卫生学院国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心
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乙型肝炎病毒(HBV)基因组各开放阅读框高度重叠,因此构建可在体外细胞模型中复制的HBV DNA质粒至少要包含1.1倍以上的HBV基因组.构建HBV1.1倍体复制子的传统克隆方法涉及多步DNA酶切/连接,操作复杂,耗时较长.本研究发展了基于新型克隆技术Gibson Assembly构建HBV1.1倍体复制子质粒的新方法,在获得HBV基因组DNA后仅需1步体外装配即可完成,利用这一方法,本研究成功从4份HBV感染者标本中获得HBV1.1倍体复制子,并通过瞬时转染Huh7细胞,证明其能够支持HBV的体外复制.本研究为从临床标本中快速获得HBV复制子克隆以研究病毒表型功能提供了更为高效的新方法.
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