【摘 要】
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本研究旨在建立致猪水肿病主要毒力因子-产志贺毒素Ⅱ型变异体大肠杆菌的环介导恒温扩增(LAMP)检测方法.针对编码Stx2e基因保守区域设计并合成4条引物,以Stx2e+大肠杆菌基因
【机 构】
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辽宁省重大动物疫病应急中心,辽宁 沈阳,110161;东北农业大学,黑龙江 哈尔滨,150030
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本研究旨在建立致猪水肿病主要毒力因子-产志贺毒素Ⅱ型变异体大肠杆菌的环介导恒温扩增(LAMP)检测方法.针对编码Stx2e基因保守区域设计并合成4条引物,以Stx2e+大肠杆菌基因组DNA为模板,分别进行了反应温度和反应时间的优化试验、特异性试验、敏感性试验以及模拟样品检测试验.结果显示,用所建立的LAMP方法,63℃水浴1h即可完成对阳性样品扩增,所得产物电泳后呈特征性梯状条带,阴性样品的扩增产物电泳后均无扩增条带.本方法对Stx2e+大肠杆菌的最低检出量为38CFU/管,敏感性高于PCR方法(3.8×103CFU/管).LAMP和PCR对模拟样品检测结果的符合率为100%.该研究为Stx2e+大肠杆菌的快速检测和仔猪水肿病的快速诊断提供了新的方法.
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