【摘 要】
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为建立犬腺病毒(CAV)和犬细小病毒(CPV)双重荧光定量PCR检测方法,本研究根据GenBank中已登录的CAV Hexon基因序列和CPV VP2基因序列,设计了2对特异性引物和2条TaqMan探针.经
【机 构】
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金宇保灵生物药品有限公司,内蒙古呼和浩特010030国家工程实验室,内蒙古呼和浩特 010030;内蒙古农业大学,内蒙古呼和浩特,010018;金宇保灵生物药品有限公司,内蒙古呼和浩特,010030;
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为建立犬腺病毒(CAV)和犬细小病毒(CPV)双重荧光定量PCR检测方法,本研究根据GenBank中已登录的CAV Hexon基因序列和CPV VP2基因序列,设计了2对特异性引物和2条TaqMan探针.经过条件优化建立了检测CAV和CPV的双重TaqMan荧光定量PCR检测方法.结果 显示,以含有CAV Hexon基因和CPV VP2基因的重组质粒标准品为模板绘制标准曲线,其相关系数(R2)均大于0.990,CAV和CPV荧光定量PCR均具有良好的线性关系.特异性试验结果显示,该方法仅对CAV-Ⅰ型、CAV-Ⅱ型和CPV检测结果为阳性,而对犬瘟热病毒、犬副流感病毒和犬冠状病毒检测结果均为阴性,表明其特异性强.该方法的敏感性检测结果显示其检测下限为10拷贝/μL.重复性试验结果显示该方法的组内和组间变异系数均小于2％,表明该方法重复性好.利用普通PCR方法与本实验建立的方法分别对感染CAV(10份)和CPV(27份)的犬模拟病料样品进行检测,两种方法对CAV和CPV检测的符合率分别可达100％和96.30％.本研究建立的荧光定量PCR检测方法具有快速、敏感、准确等优点,可以用于CAV和CPV的临床检测.
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