观察肝素对脂多糖（LPS）刺激人内皮细胞粒细胞集落刺激因子（G-CSF）水平的影响，并探讨Toll样受体4（TLR4）在其过程中的可能作用。
方法体外培养人肺微血管内皮细胞（HPMEC），取传代培养至第3～5代细胞用于实验。实验1：将细胞分为对照组、LPS刺激组（LPS 10 μg/mL）、LPS + 0.1 U/mL肝素组和LPS + 1 U/mL肝素组4组，肝素作用组于LPS刺激前15 min加入相应剂量普通肝素，对照组加入与LPS等量的磷酸盐缓冲液（PBS）；于LPS刺激24 h后收集细胞上清，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定白细胞介素-6（IL-6）、 G-CSF水平，以明确肝素对HPMEC的作用。实验2：另取细胞，分别于加入PBS或LPS前4 h加入5 μg/mL球形红细菌LPS（LPS-RS，一种TLR4拮抗剂）；于LPS刺激24 h后收集细胞上清，测定IL-6、 G-CSF水平，以明确TLR4在LPS诱导HPMEC损伤中的作用。实验3：另取细胞，分为对照组、LPS刺激组、LPS + 0.1 U/mL肝素组和LPS + 1 U/mL肝素组，处理方法同实验1；于LPS刺激1 h后收集细胞，采用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）测定TLR4蛋白表达，以明确肝素对TLR4的作用。
结果①与对照组比较，LPS刺激组IL-6及G-CSF水平明显增高〔IL-6（ng/L）：655.9±58.3比75.5±18.2，G-CSF（ng/L）：388.7±36.2比35.3±12.6，均P<0.05〕；与LPS刺激组比较，0.1 U/mL和1 U/mL肝素预处理均可明显降低IL-6及G-CSF水平〔IL-6（ng/L）：518.2±64.6、 489.1±75.6比655.9±58.3，G-CSF（ng/L）：298.8±41.0、 273.4±33.2比388.7±36.2，均P<0.05〕，两个肝素组间无明显差异，但以1 U/mL肝素作用较明显。② LPS-RS可明显抑制LPS诱导的IL-6、 G-CSF水平增高〔IL-6（ng/L）：139.1±37.6比655.9±58.3，G-CSF（ng/L）：73.7±19.7比388.7±36.2，均P<0.05〕；而单独应用LPS-RS对细胞因子无明显影响〔IL-6（ng/L）：118.2±42.1比75.5±18.2，G-CSF（ng/L）：48.4±26.8比35.3±12.6，均P>0.05〕。③ LPS刺激1 h后TLR4蛋白表达（灰度值）明显高于对照组（0.87±0.23比0.36±0.12，P<0.05）；0.1 U/mL和1 U/mL肝素预处理均可明显抑制LPS诱导的TLR4蛋白表达（0.68±0.18、 0.62±0.26比0.87±0.23，均P<0.05）。
结论LPS刺激下HPMEC中IL-6、G-CSF表达增加，肝素可能通过调节TLR4降低其表达水平，从而发挥细胞保护作用。