目的 观察人食管鳞状细胞癌细胞中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）对糖酵解的影响并探讨其可能的作用机制。方法：El3、Ecal09细胞常氧（O2体积分数为0．20）及缺氧（0z体积分数为0．01）培养，缺氧时间为6、12、24、48h，RNA干扰法稳定静默HIF-1α获得TE13/小干扰（si）HIF、Ecal09／siHIF细胞，培养方法和时间同TEl3、Ecal09。Western印迹法检测HIF-1α的表达变化；分光光度法检测培养上清液中乳酸浓度变化；实时定量PCR检测葡萄糖转运蛋白-1（GLUT-1）、乳酸脱氢酶A（LDHA）的mRNA表达变化；Western印迹法检测GLUT-1、LDHA蛋白表达变化。t或t’检验用于分析不同缺氧时间对HIF-1a蛋白表达的影响，组间差异比较采用单因素方差分析。结果TEl3、Ecal09细胞缺氧后HIF-1α表达增强，12h达高峰（t=6．11，8．31，P〈0．05）。常氧条件下，TEl3／siHIF和Ecal09／siHIF细胞乳酸分泌分别为（1．24±0．33）、（1．28±0．37）mmol／L，较TEl3和Ecal09细胞显著下降[（3．25±1．34）、（4．91±1．69）mmol／L，t=2．53、3．59，P均〈0．053；TEl3、Ecal09细胞缺氧后乳酸分泌增多[（6．48±1．73）、（8．02±1．95）mmol／L，t=2．715、2．050，P均〈0．053，TEl3／siHIF、Ecal09／siHIF细胞缺氧后乳酸分泌无明显增多（P〉0．05）。TEl3／siHIF和Ecal09／siHIF细胞中，GLUT-1、LDHA的mRNA表达均明显受抑（常氧：t=6．98、3．92、7．25、3．67，P均〈0．05），GLUT-1蛋白表达明显减弱（常氧：t=4．57、16．56，缺氧：t=6．19、6．09，P均〈0．05），LDHA蛋白表达稍减弱（P〉0．05）。结论抑制人食管鳞状细胞癌中HIF-1a可降低细胞的糖酵解水平，该途径可能涉及GLUT-1、LDHA的表达抑制；除HIF-1α以外，LDHA的蛋白表达可能同时存在其他调控因素。
小干扰RNA抑制缺氧诱导因子-1α表达对食管癌细胞糖酵解的影响
【摘 要】
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目的 观察人食管鳞状细胞癌细胞中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）对糖酵解的影响并探讨其可能的作用机制。方法：El3、Ecal09细胞常氧（O2体积分数为0．20）及缺氧（0z体积分数为0．01）培养，缺氧时间为6、12、24、48h，RNA干扰法稳定静默HIF-1α获得TE13/小干扰（si）HIF、Ecal09／siHIF细胞，培养方法和时间同TEl3、Ecal09。Western印迹法检测H
【机 构】
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南京医科大学第一附属医院消化科,210029,南京医科大学第一附属医院消化科,210029,上海交通大学附属第一人民医院松江分院消化科,南京医科大学第一附属医院消化科,210029,南京医科大学第一附
【出 处】
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中华消化杂志
【发表日期】
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2013年33期
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