大鼠釉原蛋白基因的融合表达及其纯化

来源 :牙体牙髓牙周病学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lilinjun0954
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目的:观察釉原蛋白(AMELOGENIN,AM) 基因PCR 产物在大肠杆菌中的表达.方法:利用原核表达载体PRSET,转化大肠杆菌JM109 ,通过IPTG 诱导,收菌.聚丙烯酰胺凝胶电泳.过柱纯化.结果:电泳分析表明,釉原蛋白基因PCR产物在大肠杆菌中成功的获得了表达.结论:表达的融合蛋白主要以包涵体的形式存在.利用NI- NTA 金属螯合亲和层析在变性条件下对表达的蛋白进行纯化,获得纯化蛋白.“,”Aim: To express Am gene in E.coli . Methods: The cDNA fragment of Am gene was obtained with EcoR Ⅰ and Hind Ⅲ from the plasmid PUC18/Am.The fragment was inserted into prokaryotic gene fusion vector PRSET and an expression plasmid PRSET/Am was constructed.PRSET/Am was induced by IPTG for 4h. Then metal chelate interaction chromatography was used to purify protein. Results: 150g/L SDS-PAGE revealed a new foreing protein band near Mr 24000. Conclusions: The constructed plasmid expression Am gene in E.coli .
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