【摘 要】
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目的 通过对PCR引物、反应条件及样本处理条件的摸索,建立一种不经过分离培养和DNA提取纯化步骤,直接用乳酸杆菌特异性引物快速定性、半定量妇女阴道分泌物标本中乳酸杆菌的
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目的 通过对PCR引物、反应条件及样本处理条件的摸索,建立一种不经过分离培养和DNA提取纯化步骤,直接用乳酸杆菌特异性引物快速定性、半定量妇女阴道分泌物标本中乳酸杆菌的方法.方法 设计乳酸杆菌属特异性引物;对样本处理方法和PCR反应条件进行摸索;比较用PCR法定量阴道分泌物中乳酸杆菌的结果和稀释滴种法定量结果的相关性.结果 (1)用浓度为2%的Tritonx-100处理阴道标本后可在220 bp的位置得到最佳的特异性扩增区带;(2)将MgCl2在PCR反应体系中的终浓度调节至2.5 mmol/L时,可以产生最强的特异性反应扩增带;(3)用PCR法分析阴道分泌物所得菌数与培养所得菌数之间明显相关(P＜0.05);用PCR法分析阴道分泌物所得灰度值与培养所得菌数之间明显相关(P＜0.05).结论 将阴道分泌物标本经过简单的离心、洗涤处理后,直接应用PCR法,就可以快速地定性和半定量妇女阴道分泌物标本中的乳酸杆菌.
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