【摘 要】
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目的 构建醌型二氢生物碟呤还原酶(quinonoid dihydropteridine reductase,QDPR)敲低慢病毒模型,检测其对肾小管上皮NRK-52E细胞QDPR基因的敲低情况.方法 设计合成QDPR的干涉
【机 构】
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063000 河北省唐山市,河北联合大学附属开滦总医院内分泌科;河北联合大学临床医学及实验技术系;河北联合大学医学实验中心;河北联合大学信息中心
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目的 构建醌型二氢生物碟呤还原酶(quinonoid dihydropteridine reductase,QDPR)敲低慢病毒模型,检测其对肾小管上皮NRK-52E细胞QDPR基因的敲低情况.方法 设计合成QDPR的干涉shR-NA序列,并重组入GP2慢病毒载体质粒,测序检验重组质粒是否转入该序列.三质粒共转染获得干涉慢病毒,将其感染NRK-52E细胞,新霉素筛选抗性细胞,用实时定量PCR、western blot和QDPR酶活性测量检测干涉效果.结果 重组入GP2的序列与设计序列一致,病毒转染NRK-52E细胞使其获得了新霉素抗性,QDPR基因表达、蛋白含量及酶活性显著降低.结论 本研究合成的QDPR基因敲低慢病毒能使NRK-52E细胞QDPR基因的mRNA转录、蛋白浓度及活性降低,为后续QDPR基因在糖尿病肾病中的作用研究提供了模型.
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