【摘 要】
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目的 对新发现的华支睾吸虫(Clonorchis sinensis)的组织蛋白酶D样天冬氨酸蛋白酶基因进行克隆、表达和免疫学初步研究.方法 将华支睾吸虫组织蛋白酶D样天冬氨酸蛋白酶基因(
【基金项目】
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广东省重大科技专项基金;广东省广州市科技计划;国家自然科学基金;国家高技术研究发展计划(863计划)
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目的 对新发现的华支睾吸虫(Clonorchis sinensis)的组织蛋白酶D样天冬氨酸蛋白酶基因进行克隆、表达和免疫学初步研究.方法 将华支睾吸虫组织蛋白酶D样天冬氨酸蛋白酶基因(去除了信号肽编码序列)克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠杆菌BL-21/DE3中用IPTG诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,纯化的重组蛋白免疫SD大鼠制备抗血清.用蛋白印迹(Western blotting)进行免疫学分析.结果 PCR、双酶切及DNA测序结果 均表明pET-28a(+)-组织蛋白酶D样天冬氨酸蛋白酶重组质粒构建成功.SDS-PAGE结果 表明目的 基因在大肠杆菌BL-21/DE3中获得高效表达,经亲和层析获得了高纯度蛋白.重组蛋白可被其免疫的SD大鼠血清识别,表明其具有免疫原性;并且能识别感染了华支睾吸虫的SD大鼠血清,表明具有免疫反应性.结论 华支睾吸虫组织蛋白酶D样天冬氨酸蛋白酶基因可在原核表达系统中获得具有免疫原性的高效表达,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础.
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