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采用正交试验设计方法，建立了小桐子ISSR-PCR．反应体系和扩增程序。结果表明，在20ul反应体系中含有1×PCR．缓冲液、200umol／L dNTP、0．5umol／L引物、2．0mmol／L MgCl2、0．5UTag DNA聚合酶和90ng模板DNA最适用于小桐子ISSR-PCR．扩增。适宜的扩增程序为94℃ 7min；94℃ 1min，44℃-56℃（退火温度随引物不同而定）45s．72℃ 1min，35个循环；72℃ 7min；4℃保存。