丙型肝炎NS5A基因多克隆抗体的制备

• 作 者: 刘秀财 李耕慧 郭伟华
• 机 构: 齐齐哈尔医学院生化教研室,齐齐哈尔第一人民医院老干部病房,解放军第三二四医院急诊科
• 出 处: 中国医药导报
• 发表日期: 2010年15期
• 关键词: HCV—NS5A基因 原核表达 蛋白纯化 HCV-NS5A gene Prokaryotic expression Protein purification

目的：构建丙型肝炎病毒（HCV）NS5A蛋白原核表达载体，获得高产量的纯化目的蛋白，并制备其多克隆抗体。方法：应用聚合酶链反应技术，PCR扩增获得NS5A基因，将NS5A基因插入至原核表达载体pET-32a（＋）中，转化大肠埃希菌DH5α提取质粒，验证正确后，转化大肠埃希菌BL21中，以IPTG诱导，获得NS5A融合蛋白的可诱导性表达．通过SDS—PAGE电泳、Western blot免疫印迹分析证实融合蛋白表达的特异性。利用Ni^＋亲和柱对表达蛋白进行纯化及柱上复性。纯化蛋白免疫新西兰兔，利用Weste