探讨丹参素冰片酯(TBE)对同型半胱氨酸(Hcy)诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)损伤的作用及机制。
方法以密度梯度离心法结合贴壁培养法体外分离和培养BMSC。将BMSC分为对照组(未干预)、TBE-1组(加入含10 μmol/L TBE-1溶液100 μl)、TBE-2组(加入含10 μmol/L TBE-2溶液100 μl)、Hcy组(加入含0.5 mmol/L Hcy溶液100 μl)、Hcy+TBE-1组(加入含10 μmol/L TBE-1溶液100 μl和含0.5 mmol/L Hcy溶液100 μl)、Hcy+TBE-2组(加入含10 μmol/L TBE-2溶液100 μl和含0.5 mmol/L Hcy溶液100 μl)、Hcy+TBE-1+阻断剂组[加入含10 μmol/L TBE-1溶液100 μl、0.5 mmol/L Hcy溶液100 μl和25 μmol/L LY294002(磷脂酰肌醇3激酶的特异性阻断剂)溶液100 μl]和Hcy+TBE-2+阻断剂组(加入含10 μmol/L TBE-2溶液100 μl、0.5 mmol/L Hcy溶液100 μl和25 μmol/L LY294002溶液100 μl)。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖活性；黄嘌呤氧化酶法检查细胞总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性，TBA法检测细胞丙二醛水平，评价细胞氧化损伤程度；透射电子显微镜观察各组细胞超微结构；免疫细胞化学法检测细胞蛋白激酶B(PKB)及核转录因子-κB(NF-κB)的表达水平。
结果(1)干预1、12、24和48 h后，TBE-1组和TBE-2组细胞的增殖活性均高于正常组(P均<0.01)，TBE-1组与TBE-2组的细胞增殖活性差异均无统计学意义(P均>0.05)。(2)TBE-1组和TBE-2组的T-SOD活性均高于对照组(P均<0.01)；Hcy组、Hcy+TBE-1组和Hcy+TBE-2组的T-SOD活性均低于对照组(P均<0.01)；对照组、Hcy+TBE-1+阻断剂组和Hcy+TBE-2+阻断剂组之间的T-SOD活性差异均无统计学意义(P均>0.05)；Hcy+TBE-1组和Hcy+TBE-2组的T-SOD活性均高于Hcy组(P均<0.01)；Hcy+TBE-1+阻断剂组的T-SOD活性高于Hcy+TBE-1组(P<0.05)；Hcy+TBE-2+阻断剂组的T-SOD活性高于Hcy+TBE-2组(P<0.05)。TBE-1组和TBE-2组的丙二醛水平均低于对照组(P均<0.01)；Hcy组、Hcy+TBE-1组、Hcy+TBE-2组、Hcy+TBE-1+阻断剂组和Hcy+TBE-2+阻断剂组的丙二醛水平均高于对照组(P均<0.01)；Hcy+TBE-1组和Hcy+TBE-2组的丙二醛水平均低于Hcy组(P均<0.01)；Hcy+TBE-1+阻断剂组的丙二醛水平高于Hcy+TBE-1组(P<0.05)；Hcy+TBE-2+阻断剂组的丙二醛水平高于Hcy+TBE-2组(P<0.05)。(3)透射电子显微镜下，Hcy组、Hcy+TBE-1+阻断剂组、Hcy+TBE-2+阻断剂组与对照组比较，BMSC的细胞器肿胀明显，衰老凋亡细胞明显增多，而TBE-1组和TBE-2组细胞内粗面内质网丰富，细胞代谢极为活跃；与Hcy组比较，Hcy+TBE-1组及Hcy+TBE-2组BMSC的细胞器水肿减轻，衰老凋亡细胞数量减少，细胞损伤程度减轻。(4)TBE-1组和TBE-2组的PKB水平均高于对照组(P均<0.01)；Hcy组、Hcy+TBE-2组、Hcy+TBE-1+阻断剂组和Hcy+TBE-2+阻断剂组的PKB水平均低于对照组(P均<0.01)；对照组与Hcy+TBE-1组之间的PKB水平差异无统计学意义(P>0.05)；Hcy+TBE-1组和Hcy+TBE-2组的PKB水平均高于Hcy组(P均<0.05)；Hcy+TBE-1+阻断剂组的PKB水平低于Hcy+TBE-1组(P<0.05)；Hcy+TBE-2+阻断剂组的PKB水平低于Hcy+TBE-2组(P<0.05)。TBE-1组和TBE-2组的NF-κB水平均高于对照组(P均<0.01)；Hcy组、Hcy+TBE-1组、Hcy+TBE-2组、Hcy+TBE-1+阻断剂组和Hcy+TBE-2+阻断剂组的NF-κB水平均低于对照组(P<0.01或0.05)；Hcy+TBE-1组和Hcy+TBE-2组的NF-κB水平均高于Hcy组(P均<0.05)；Hcy+TBE-1+阻断剂组的NF-κB水平低于Hcy+TBE-1组(P<0.05)；Hcy+TBE-2+阻断剂组的NF-κB水平低于Hcy+TBE-2组(P<0.05)。
结论TBE可改善Hcy对BMSC的损伤，其机制可能与磷脂酰肌醇3激酶/PKB信号转导通路中的PKB及下游信号蛋白NF-κB活化有关。