副结核分枝杆菌MAP1068胞外蛋白酶的特性研究

• 作 者: 王忠星 党光辉 刘虹秀 臧鑫鑫 崔莹莹 崔子寅 宋宁宁 陈利
• 机 构: 吉林农业大学动物科学技术学院,中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室
• 出 处: 中国预防兽医学报
• 发表日期: 2019年5期
• 关键词: 副结核分枝杆菌 MAP1068 特性 酶活性 Mycobacterium avium subsp.Paratuberculosis MAP1068 charac
• 基金项目: 牛羊重要疫病免疫防控新技术研究/牛羊疫苗新型佐剂及工艺研究(2017YFD0500906),黑龙江省青年科学基金项目(QC201834).

为研究副结核分枝杆菌(MAP)1068蛋白的特性,本研究以MAP参考株K10基因组为模板,PCR扩增其map1068基因,构建p ET28a-map1068重组载体,将其转化BL21后诱导表达并纯化MAP1068蛋白。利用纯化的重组蛋白免疫(100μg/只/0.1 m L)小鼠制备多克隆抗体,应用该抗体对MAP1068蛋白进行亚细胞定位。以酪蛋白为底物测定MAP1068蛋白的酶活性。结果显示,MAP1068蛋白以包涵体形式表达;经变性、复性、亲和层析纯化后获得目的蛋白;将该蛋白免疫小鼠后其血清抗体效价可达