【摘 要】
：
目的 构建携带超抗原SEA基因的肿瘤特异性溶瘤腺病毒表达载体.方法 采用聚合酶链反应(PCR)技术,从产SEA的葡萄球菌标准菌株ATCC13565基因组DNA中获得SEA全长基因序列,酶切后克隆入pCA13质粒,构建重组病毒质粒pCA13-SEA.将鉴定正确的pCA13-SEA与含有腺病毒右臂的质粒pBHGE3通过Lipofectamine 2000共转染HEK293细胞,经同源重组产生重组腺病毒
【机 构】
：
221009,江苏徐州,东南大学医学院附属徐州医院泌尿外科,221009,江苏徐州,东南大学医学院附属徐州医院泌尿外科,221009,江苏徐州,东南大学医学院附属徐州医院泌尿外科,221009,江苏徐
论文部分内容阅读
目的 构建携带超抗原SEA基因的肿瘤特异性溶瘤腺病毒表达载体.方法 采用聚合酶链反应(PCR)技术,从产SEA的葡萄球菌标准菌株ATCC13565基因组DNA中获得SEA全长基因序列,酶切后克隆入pCA13质粒,构建重组病毒质粒pCA13-SEA.将鉴定正确的pCA13-SEA与含有腺病毒右臂的质粒pBHGE3通过Lipofectamine 2000共转染HEK293细胞,经同源重组产生重组腺病毒Ad-SEA.Ad-SEA在293细胞中大量扩增并通过氯化铯密度梯度离心法纯化、测定其滴度.结果 克隆得到771bpSEA全长基因.经PCR扩增、酶切鉴定、序列测定证实,SEA基因成功克隆到溶瘤腺病毒载体中,可实现SEA基因的表达,且病毒滴度达6.5×109pfu/ml.结论 成功构建表达超抗原SEA基因的溶瘤腺病毒载体。
其他文献
我们应用免疫组织化学法检测60例胃癌组织中Survivin和磷酸酶和张力蛋白同源物基因PTEN及Ki67的表达,并探讨其与胃癌临床病理因素的关系。
为了研究和防治排斥反应,有必要建立稳定、符合胰腺移植免疫排斥反应特点的异基因大鼠全胰十二指肠移植(WPDT)模型.既往我们应用双套管+腹主动脉三通管外接法建立的WPDT模型[1],存在术后动脉玻璃套管容易栓塞、外接三通管难以管理、受鼠存活时间不能满足研究排斥反应要求等缺点,为此我们又通过改进动脉吻合方式,解决了上述问题。
目的 观察人α1,2-岩藻精苷转移酶(HT)和衰变加速因子(DAF)基因转移对抑制血管内皮细胞激活从而克服异种移植急性血管排斥反应的能力.方法 通过显微注射建立转基因小鼠动物模型,Southern印迹杂交和流式细胞汁数筛选出人HT和/或DAF基因整合与表达阳性的子代转基因小鼠.研究表达不同目的 基因的转基凶小鼠血管内皮细胞与15%人血清孵育后溶破细胞的百分数,免疫细胞化学染色检测细胞核因子(NF)
人工脂质体具有类似于细胞膜的双分子层结构,具有稳定缓释和网状细胞靶向性等特征,是高效的药物和大分子物质载体[1].利用脂质体的特性,我们将肿瘤细胞膜碎片与人工脂质体质量组,制备携带肿瘤膜抗原特征的重组脂质体,探讨其体外免疫原性的变化。
近半个世纪以来,脾脏外科取得了长足的进步,现已成为腹部外科发展较快的领域之一,同时,脾脏外科的发展过程也是科学探索、正确认识脾脏功能的过程。
目的 探讨弥漫性脑损伤脑组织不同时间段bax-mRNA、bcl-2 mRNA表达及与脑细胞凋亡的关系.方法 依据Marmarou's弥漫性脑损伤动物模型有改进,应用SD雄性大鼠55只,随机分为两组:假手术(对照组)(n=5)和弥漫性脑损伤组(n=50),损伤组再按照不同时间段分组(n=5),损伤后大鼠自由进食饮水,按0.5、1、3、6、12、24、48、72 h、1周、2周等时间段提取大鼠皮层脑组
经皮椎体成形术(PVP)是近20年来发展起来的新技术,是在影像装置引导下通过椎弓根或直接向椎体内注入骨水泥的方法,以达到增强椎体强度和稳定性,缓解腰背疼痛的目的.经皮后凸成形术(PKP)是PVP技术发展而来,通过球囊扩张骨折椎体,使椎体高度得以恢复,纠正脊柱的后凸畸形,并进一步在较低的压力下注人骨水泥,恢复椎体的强度.尽管其确切的机制尚小明确,而且骨质疏松性椎体压缩性骨折和转移性肿瘤患者的疼痛缓解
目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对兔耳瘢痕模型的影响作用.方法 建立48个兔耳增生性瘢痕模型,将其随机分为bFGF治疗组与磷酸盐缓冲液(PBS)对照组,观察bFGF对创面愈合过程中瘢痕形成的影响.结果 形态学分析结果显示治疗组3个月后瘢痕外观、厚度及质地均优于对照组,表现出良好的愈合质量;对照组羟脯氨酸(HPr)表达较高,且随时间表现为增高趋势,伤后3个月达到高峰;而bFGF治疗组HP
目的 观察陷阱受体3(DcR3)反义核苷酸(ASODN)与顺铂对胶质瘤细胞的影响.方法 设计DcR3反义核苷酸,转染U251细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot方法观察DcR3 mRNA和蛋白有无降低,用噻唑蓝(MTT)比色法、荧光显微镜DAPI染色分别检测对照组、顺铂组、反义核苷酸组、协同作用组对胶质瘤细胞U251的影响.结果 反义DcR3寡核苷酸组可有效地降低D