【摘 要】
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将磷脂酰胆碱专一性磷脂酶D2基因及其功能缺陷点突变基因(K758B)从真核表达载体pCGN中克隆至带有绿色荧光标记蛋白的穿梭质粒pAdTrack-CMV中;再与腺病毒骨架载体一起在大肠杆
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将磷脂酰胆碱专一性磷脂酶D2基因及其功能缺陷点突变基因(K758B)从真核表达载体pCGN中克隆至带有绿色荧光标记蛋白的穿梭质粒pAdTrack-CMV中;再与腺病毒骨架载体一起在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,成功构建磷脂酶D2重组腺病毒.该病毒颗粒感染人胚肾293细胞,高效表达磷脂酶D2及其功能缺陷蛋白.这种表达对M3乙酰胆碱受体介导的细胞内磷脂酶D激活无影响.但磷脂酶D2功能缺陷蛋白对蛋白激酶C介导的胞内磷脂酶D激活有显著抑制作用;相反,磷脂酶D2蛋白有显著增强作用.结果表明,磷脂酶D2基因的同源重组腺病毒的表达构建是研究其在细胞内的生理功能的有力工具,细胞内磷脂酶D2激活与蛋白激酶C调控的效应特异性.
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