【摘 要】
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目的:通过过表达手段上调细胞周期调节蛋白依赖性激酶2-关联蛋白1(CDK2-AP1)基因在乳腺癌细胞MCF-7中的表达,并观察其对MCF-7细胞生长和细胞周期调控的作用。方法:将CDK2-AP1
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目的:通过过表达手段上调细胞周期调节蛋白依赖性激酶2-关联蛋白1(CDK2-AP1)基因在乳腺癌细胞MCF-7中的表达,并观察其对MCF-7细胞生长和细胞周期调控的作用。方法:将CDK2-AP1基因的编码框构建于慢病毒表达载体,导入MCF-7细胞,应用实时定量PCR和Western印迹验证CDK2-AP1基因mRNA和蛋白的表达效率。利用MTT法绘制生长曲线、克隆形成实验观察CDK2-AP1基因过表达后MCF-7细胞生长的变化,PI染色流式细胞仪检测MCF-7细胞周期的改变。通过Western印迹检测CDK2-AP1过表达后,细胞周期相关蛋白(CDK2,CDK4,P16Ink4A,P21Cip1/Waf1)的表达。结果:过表达CDK2-AP1基因的慢病毒感染MCF-7细胞可上调其mRNA表达6.94倍,蛋白表达也十分显著地增高,两者相一致。生长曲线显示MCF-7细胞过表达CDK2-AP1基因后,增殖能力显著降低(P<0.05);克隆形成实验表明,其形成的克隆数目同样显著减少(P<0.05);流式细胞仪检测证实MCF-7细胞过表达CDK2-AP1能够使细胞周期出现G1期阻滞,并且出现凋亡峰;CDK2-AP1基因表达上调导致P21Cip1/Waf1和P16Ink4A蛋白表达上调,CDK2和CDK4蛋白表达下调。结论:CDK2-AP1基因具有抑癌基因的功能,在乳腺癌MCF-7细胞过表达该基因能够抑制细胞的生长和克隆形成能力,并且使细胞阻滞于G1期。
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