人源抗-HAV全分子抗体在CHO细胞中的表达

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目的 :构建人源抗HAV全分子抗体的CHO细胞表达体系。方法 :将抗HAV抗体轻链全分子 (信号肽与VLCL)基因克隆至表达载体pCIneo中 ;将重链信号肽、重链 (γ)VHCH1 和Fc基因进行重组形成重链全分子基因 ,再将其克隆到真核表达载体pCdhfr1中。将轻、重链全分子表达载体共转染CHO dhfr胞 ,用G4 18和甲氨蝶呤(MTX)筛选细胞克隆 ,ELISA法检测细胞培养上清中的抗HAV活性 ,增加MTX浓度进行加压筛选。用蛋白L亲和层析柱从培养上清中纯化重组抗体。结果 :构建的真核表达载体可实现抗HAV全分子抗体在CHO细胞中的分泌表达 ,纯化的重组抗体在还原SDSPAGE中表现为相对分子质量约 2 5 0 0 0、5 0 0 0 0两条带 ;Western印迹表明 ,重组抗体全分子和重链分子均可和羊抗人Fc抗体发生特异性免疫反应。结论 :抗HAV全分子抗体在CHO细胞中表达 ,为基因工程生产具有完整功能的全分子抗体奠定了基础
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