【摘 要】
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目的 探讨槲皮素预处理通过AMPK/mTOR信号通路介导的自噬对肝缺血再灌注损伤的保护作用.方法 大鼠使用随机数字表法分为对照组、模型组、槲皮素组、氯喹(自噬抑制剂)组和槲皮素+氯喹组.手术前3 d,槲皮素组大鼠灌胃给予0.1 g/kg槲皮素,氯喹组大鼠腹腔注射0.02 g/kg氯喹,槲皮素+氯喹组灌胃给予槲皮素同时腹腔注射氯喹,对照组和模型组给予等体积溶剂,每天1次.构建肝缺血再灌注大鼠模型并于再灌注6h后处死大鼠.全自动生化分析仪检测大鼠肝功能指标,包括谷氨酸-丙酮酸转氨酶(ALT)和天门冬氨酸酰基转
【机 构】
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山东医学高等专科学校医学系,济南 250002;山东省济南市第四人民医院普通外科,山东大学附属省立医院,济南 250000;山东大学齐鲁医院,济南 250021
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目的 探讨槲皮素预处理通过AMPK/mTOR信号通路介导的自噬对肝缺血再灌注损伤的保护作用.方法 大鼠使用随机数字表法分为对照组、模型组、槲皮素组、氯喹(自噬抑制剂)组和槲皮素+氯喹组.手术前3 d,槲皮素组大鼠灌胃给予0.1 g/kg槲皮素,氯喹组大鼠腹腔注射0.02 g/kg氯喹,槲皮素+氯喹组灌胃给予槲皮素同时腹腔注射氯喹,对照组和模型组给予等体积溶剂,每天1次.构建肝缺血再灌注大鼠模型并于再灌注6h后处死大鼠.全自动生化分析仪检测大鼠肝功能指标,包括谷氨酸-丙酮酸转氨酶(ALT)和天门冬氨酸酰基转移酶(AST);苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠肝组织病理学变化;酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠血清中炎性因子含量,包括白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β);单磺尸胺染色法(MDC)观察并计算各组大鼠肝组织细胞自噬率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠肝组织中Beclin1蛋白表达水平及AMPK、mTOR蛋白磷酸化水平.结果 对照组大鼠肝组织结构完整,肝细胞排列整齐,无显著坏死现象.与对照组相比,模型组大鼠肝组织结构紊乱,肝细胞排列疏松,出现坏死,ALT、AST水平、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)含量以及mTOR蛋白磷酸化水平显著升高(P<0.05),肝组织细胞自噬率、Beclin1蛋白表达水平及AMPK蛋白磷酸化水平显著降低(P<0.05).与模型组相比,槲皮素组大鼠肝组织上述病理损伤显著缓解,ALT、AST水平、IL-6、TNF-α、IL-1β含量以及mTOR蛋白磷酸化水平显著降低(P<0.05),肝组织细胞自噬率、Beclin1蛋白表达水平及AMPK蛋白磷酸化水平显著升高(P<0.05);氯喹组大鼠肝组织上述病理损伤显著加重,ALT、AST水平、IL-6、TNF-α、IL-1β含量以及mTOR蛋白磷酸化水平显著升高(P<0.05),肝组织细胞自噬率、Beclin1蛋白表达水平及AMPK蛋白磷酸化水平显著降低(P<0.05).与槲皮素组相比,槲皮素+氯喹组大鼠肝组织病理损伤显著加重,ALT、AST水平、IL-6、TNF-α、IL-1β含量以及mTOR蛋白磷酸化水平显著升高(P<0.05),肝组织细胞自噬率、Beclin1蛋白表达水平及AMPK蛋白磷酸化水平显著降低(P<0.05);与氯喹组相比,槲皮素+氯喹组大鼠肝组织病理损伤显著减轻,ALT、AST水平、IL-6、TNF-α、IL-1β含量以及mTOR蛋白磷酸化水平显著降低(P<0.05),肝组织细胞自噬率、Beclin1蛋白表达水平及AMPK蛋白磷酸化水平显著升高(P<0.05).结论 槲皮素预处理可能通过激活肝缺血再灌注损伤大鼠肝组织中AMPK/mTOR信号通路介导的自噬,从而减少炎症反应,缓解肝损伤.
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