人结核杆菌热休克蛋白70启动子对外源基因在分枝杆菌中表达的影响

来源 :中华微生物学和免疫学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:saoluan
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利用聚合酶链反应技术(Polymerase chain reaction,PCR)扩增得到150bp的人结核杆菌热休克蛋白(Heat shock protein,HSP)70启动子和约650bp的外源基因日本血吸虫谷胱甘肽硫转移酶(Glutathione S-transferase,GST)的cDNA片段。并采用Sanger双脱氧链终止法测定了人结核杆菌HSP70起始密码ATG上游150bp的启动子序列。在这一区域可见与大肠杆菌(E. coli)-35和-10区同源的碱基顺序TTGAG和ATCATA,以及ATG上游-12~-8处的核糖体结合位点GGAGG。然后将人结核杆菌HSP70启动子和日本血吸虫GST编码基因克隆到E. coli-分枝杆菌穿梭质粒pBCG-2000中,构成能表达日本血吸虫GST基因的E. coli-分枝杆菌穿梭表达载体pBCG-Sj26。电转化耻垢分枝杆菌后,用卡那霉素筛选出阳性重组子。含有pBCG-Sj26的耻垢分枝杆菌在热和过氧化氢的作用下均诱导出GST的表达。其表达产物分子量为26×103,经聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)后,扫描分析,表明重组GST(rGST)占菌体总蛋白的10%。本研究为HSP70启动子对外源基因在分枝杆菌中表达以及将为分枝杆菌发展成多价载体疫苗提供了科学依据。

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